前情提要：

中和試驗是做疫苗的小伙伴最終都要面臨的操作，不可避免都要會做，而且結(jié)果必須精準(zhǔn)。疫苗好壞的評估離不開這個最核心的數(shù)據(jù)，疫苗的另外一個評估手段就是動物保護試驗，這個是在動物本體上進行，更加復(fù)雜，所以在細胞水平上 的操作更加需要我們掌握，但是我在做中和時候老出現(xiàn)問題，比如血清污染，還有就是對照病毒的不成立，這種很打擊我的熱情和信心。

下面針對我之前出現(xiàn)的問題及之后進行的針對性措施進行總結(jié)（末尾有詳細操作）。有問題都可以私信交流，本人有著失敗的經(jīng)驗和成功的經(jīng)驗。

Q:待檢血清的污染問題

從動物上采集分離的血清，在上細胞后污染了，這是太打擊人了，但是不注意細節(jié)的這點往往造成很大的麻煩。

A:首先添加雙抗，1%的雙抗能夠避免很多問題，雖然有的人不喜歡加雙抗，怕影響細胞的狀態(tài)是，但是為了避免污染，必須要進行雙抗的添加。其次，分離血清時候，必須使用滅菌的EP管子，分離全程在超凈臺操作。

Q:結(jié)果不準(zhǔn)確，比如病毒接毒后，細胞不感染，那就是病毒對照不成立，中和結(jié)果的判定基本就廢了。

A:測定TCID50要準(zhǔn)確，不要似是而非，這就是確保細胞的狀態(tài)沒問題，細胞必須要健康正常，不要拿狀態(tài)不好的細胞進行測定 ，不然也是白搭。養(yǎng)好細胞再做實驗，這是很多人沒注意的問題。

Q：做完之后，進行判定結(jié)果。

A:很多人對TCID50和中和的判定是完全沒概念，這種是需要完全按照Reed-Muench兩氏法判定法進行，這個一開始看不懂，可以找?guī)熜謳熃阃耆忝靼自龠M行中和試驗，不要想當(dāng)然的進行實驗。

還有具體的問題，可以多多交流呀。