一.想請您具體說明一下反沖色譜柱的方法，是不連檢測器嗎？

? ? ? ?答：反沖就是將柱子反向連到系統(tǒng)中。因為有污染物反沖出來，當然不連檢測器，出液端直接接到廢液瓶就可以。

二.如果不使用不銹鋼接頭，而改用PEEK頭，是否可以完全解決接頭匹配問題？

? ? ? ?答：色譜柱接頭其實大都不是色譜柱廠商自己生產(chǎn)的，供貨商有多個，VICI，Upchurch，Parker等，他們的標準相互之間不統(tǒng)一，那色譜柱接頭的標準就統(tǒng)一不起來。不過一般這個問題也不難解決的，換個接頭就可以了，而且現(xiàn)在有了萬用接頭，可以配所有不同類型的柱頭，不泄露，連接死體積又很小。

三.有的廠商為避免堵塞，使用了較大孔徑（2-5um）的前篩板，這種情況反沖會將填料沖出。那么，你們在使用說明書中會說明前后篩板的孔徑嗎？

? ? ? ?答：如果前后篩板孔徑不對稱，廠商肯定也會在說明書里特別提到的。

四.我在做多肽藥物時遇到下列問題：1）. 基線不穩(wěn)定波動大，流動相 A ：1％TFA水溶液 B:1％TFA乙腈溶液檢測波長210nm 流速1.0ml/ml 什么原因？怎么解決？TFA有什么作用？流動相中不加TFA見不到主峰，基線良好。2）做完肽類樣品時怎么沖洗C18比較好；3）藥典上介紹測定分子量大于2000的樣品，選擇柱子填料的孔徑為30nm，30nm與10nm對結(jié)果有什么區(qū)別？

? ? ? ?答：應(yīng)該是起“離子對”的作用吧。在做多肽類樣品的時候，300A孔徑的填料相對100A孔徑肯定要選擇性好點，也就是分離度相對比較好點。流動相加入TFA，在反相色譜分離多肽和蛋白質(zhì)的實驗中，使用三氟乙酸 (TFA) 作為離子對試劑是常見的手段。流動相中的三氟乙酸通過與疏水鍵合相和殘留的極性表面以多種模式相互作用，來改善峰形、克服峰展寬和拖尾問題。

? ? ? ?三氟乙酸優(yōu)于其他離子修飾劑的原因是它容易揮發(fā)，可以方便地從制備樣品中除去。另一方面，三氟乙酸的紫外最大吸收峰低于 200nm ，對多肽在低波長處的檢測干擾很小。

五.waters AtlantisC18柱可以用較高比例的流動相，那麼用完后應(yīng)該怎麼清洗？在什麼體系中保存比教合適？

? ? ? ?答：反相柱都可以用下面通用的方法清洗維護：

? ? ? ?流動相中不含緩沖鹽：分析完成后，用甲醇（或乙腈）：水＝90：10反向沖洗色譜柱45min

? ? ? ?流動相中含有緩沖鹽：分析完成后，先用甲醇（或乙腈）：水＝10：90反向沖洗45min，然后再用甲醇（或乙腈）：水＝90：10反向沖洗色譜柱45min；（注意：甲醇（或乙腈）：水＝10：90容易長菌，使用時間不可超過3天）；

? ? ? ?水性柱保存體系也不特別：短期保存在所用的流動相中（不含緩沖鹽），中長期保存在純甲醇（乙腈）或80%的甲醇（乙腈）/水中。

總結(jié)

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