Cyanine菁染料用于小鼠活體成像實(shí)驗(yàn)步驟和方法
準(zhǔn)備工作：
首先我們用不同的活性基團(tuán)的Cyanine菁染料和相應(yīng)的活性基團(tuán)的生物分子或小分子藥物發(fā)生反應(yīng)，鏈接到一起。
Cyanine3 NHS ester和帶NH2的藥物分子連接
Cyanine7 maleimide和帶SH的藥物分子或生物分子連接
Cyanine5 amine和帶NHS的藥物分子或小分子連接
Cyanine5.5 azide和Cyanine3.5 alkyne用于連接DNA和oligonucleotides
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
SPF級(jí) BALB/C裸鼠，6～8 周齡, 18～20克, 實(shí)驗(yàn)前24 h 自由進(jìn)食、飲水。
于實(shí)驗(yàn)裸鼠腹腔內(nèi)注射2%戊巴比妥鈉300μL(215 mg/ kg)麻醉動(dòng)物。將裸鼠俯臥位平放于小動(dòng)物多光譜活體成像系統(tǒng)的記錄暗箱中。
實(shí)驗(yàn)時(shí)將Cy7 或Cy7 標(biāo)記的生物分子或藥物DMSO 稀釋后,于裸鼠尾靜脈注射200μL( 0.5 mg/g) [最佳用量和時(shí)間需要客戶根據(jù)自己的儀器和藥物試劑等條件優(yōu)化] ,每5min 記錄1張動(dòng)物在體內(nèi)發(fā)射熒光的成像圖片,分析熒光藥物的分布情況。對(duì)照鼠不注射藥物，進(jìn)行同時(shí)記錄。記錄結(jié)束后迅速解剖裸鼠的心、肝、脾、肺、腎等臟器，進(jìn)行成像。
Cy7 檢測(cè)時(shí)激發(fā)波長(zhǎng)700～770 nm 帶通 ,發(fā)射波長(zhǎng)790 nm 長(zhǎng)通。液晶可調(diào)諧濾光片掃描范圍 780～950 nm ,掃描步進(jìn)10 nm。曝光時(shí)間為500 ms。
不同的藥物代謝時(shí)間不一樣，注射入裸鼠體內(nèi)，熒光立即分布全身，然后逐步向膀胱聚集，呈現(xiàn)顯著的腎排泄的特點(diǎn)一般4~6 小時(shí)，快得只有30 分鐘;如果是骨骼等部位靶點(diǎn)的Cy7 標(biāo)記藥物，有客戶反映一周后活體成像系統(tǒng)仍能檢測(cè)到熒光成像。
器官切片觀察：將解剖的器官迅速放置于4%多聚甲醛固定4 小時(shí)以上，0%，20%，30%PBS 蔗糖依次沉底，20μm 切片，多聚賴氨酸洗過的載玻片貼片，晾干，DAPI 染色。共聚焦顯微鏡觀察，激光器為氦氖 633 nm。
