上期我們介紹了感染腎臟的常見注射方法。本期主要介紹感染肺的常用注射方法：鼻內(nèi)滴注、氣管插管注射和氣管內(nèi)注射，其中鼻內(nèi)滴注經(jīng)Santry等[1]研究人員改良后感染效果更佳。本次將詳細(xì)介紹這幾種注射方法，文字描述末尾有附上視頻教程鏈接哦，小伙伴可直接將網(wǎng)址復(fù)制到瀏覽器中觀看學(xué)習(xí)~

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圖 AAV感染小鼠肺部的注射方法

a.鼻內(nèi)滴注 b.改良鼻內(nèi)滴注 c.氣管插管注射 d.氣管內(nèi)注射[1]

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改良的鼻內(nèi)滴注操作步驟[1]

（1）小鼠經(jīng)鼻吸入2.5%異氟醚和O2（1L/min）麻醉，切勿過度麻醉以保持小鼠穩(wěn)定的呼吸頻率；

（2）右手捏住小鼠后頸，左手輕輕捏閉小鼠嘴巴，防止其口部呼吸；

（3）在鼻腔內(nèi)緩緩滴入40μL?AAV，使其全部被小鼠吸入；

（4）小鼠保持上述姿勢30s，使AAV分布至下呼吸道；

（5）小鼠放回籠中恢復(fù)約10min，重復(fù)一次上述操作（共注射80μL AAV）。

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視頻教程：

https://www.jove.com/cn/v/10215/compound-administration-iii

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氣管插管操作步驟[1-2]

（1）小鼠經(jīng)鼻吸入2.5%異氟醚和O2（1L/min）麻醉；

（2）使小鼠仰臥，并將其前腿粘在手術(shù)板上，上頜切牙用橡皮筋固定；

（3）將高強(qiáng)度光纖柔性照明器放置在距胸骨腹側(cè)1cm的位置，光纖通過氣管照射，便于區(qū)分食管腔和氣管腔；

（4）使用鋸齒狀鈍鼻彎（20°角）不銹鋼陡峭鉗將小鼠舌頭向外拉伸至口腔側(cè)面，以便觀察會厭和喉部，整個(gè)手術(shù)過程舌頭保持這個(gè)位置；

（5）將導(dǎo)管插入氣管至氣管分叉前的位置；

（6）使用注射器通過導(dǎo)管注射40-80μL AAV；

注：在吸取40-80μL AAV之前先吸取約100μL的空氣，防止AAV丟失并促進(jìn)其進(jìn)入肺部深處；

（7）小鼠保持該姿勢5min，以便AAV分布至下呼吸道；

（8）把導(dǎo)管移出，將小鼠輕輕從工作臺拿下，并將頭部和胸部用折疊的紙巾小幅度墊高，以保證小鼠順暢的呼吸；

（9）將小鼠放回籠中，至小鼠完全清醒。

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視頻教程：

https://www.jove.com/cn/v/52261/intubation-mediated-intratracheal-imit-instillation-noninvasive-lung

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氣管內(nèi)注射操作步驟[3]

（1）小鼠經(jīng)鼻吸入2.5%異氟醚和O2（1L/min）麻醉；

（2）使小鼠仰臥，并將其前腿粘在手術(shù)板上，頸部剃毛并使用聚維酮碘消毒手術(shù)區(qū)域；

（3）用手術(shù)剪刀在手術(shù)區(qū)域做一個(gè)5-7mm的小切口；

（4）一只手使用彎曲鉗固定小鼠氣管，另一只手握住注射器，使注射器針頭斜面朝上，與氣管成45°角；

（5）將40-80μL?AAV緩慢注入氣管，全部注射完畢等待5s緩慢拔出針頭；

（6）縫合傷口，將小鼠放回籠中，至小鼠完全清醒。

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視頻教程：

https://www.jove.com/cn/v/1941/direct-tracheal-instillation-of-solutes-into-mouse-lung

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以上就是感染肺部常用的注射方法，其中鼻內(nèi)滴注操作簡單，創(chuàng)傷小，但無法感染肺葉遠(yuǎn)端，氣管插管注射和氣管內(nèi)注射可感染肺葉遠(yuǎn)端，但操作難度大，小伙伴可根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇合適的注射方法。AAV5對肺部的親和性較高，AAV6和AAV9也是常用于肺部感染的血清型，另外漢恒生物還可提供肺上皮細(xì)胞特異性啟動子SP-C（SFTPC）用于目的基因在靶細(xì)胞特異性表達(dá)。更多關(guān)于肺部感染的問題歡迎咨詢漢恒生物！

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參考文獻(xiàn)

[1]?Santry L A , Ingrao J C , Yu D L ,et al.AAV vector distribution in the mouse respiratory tract following four different methods of administration[J].Bmc Biotechnology, 2017, 17(1):43.

[2]?Sandhya D,Kelvin M,Sucie H C, et al. A simple method of mouse lung intubation.[J]. Journal of visualized experiments : JoVE,2013(73).

[3]?Laura P , Lieshout V , Jakob M ,et al.AAV-Mediated Gene Delivery to the Lung.[J].Methods in molecular biology (Clifton, N.J.), 2019.?

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