Calcein-AM,細(xì)胞可透過性染料,是一種可對活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞染色試劑，由于它在Calcein的基礎(chǔ)上加強(qiáng)了疏水性，因此能夠輕易穿透活細(xì)胞膜。當(dāng)其進(jìn)入到細(xì)胞質(zhì)后，酯酶會將其水解為Calcein留在細(xì)胞內(nèi)，發(fā)出強(qiáng)綠色熒光。與其它同類試劑 (如BCECF-AM和Carboxy-fluorescein diacetate) 相比，Calcein-AM是最適合作為熒光探針去染活細(xì)胞的，因為它的細(xì)胞毒性很低。Calcein不會抑制任何的細(xì)胞功能如增殖或淋巴球的趨化性。使用了Calcein的活性檢測的實(shí)驗結(jié)果是十分可信并且與標(biāo)準(zhǔn)的51Cr-釋放法所得結(jié)果相一致的。Calcein的激發(fā)和發(fā)射波長分別為490nm和515nm。Calcein-AM可與PI結(jié)合使用，分別對活細(xì)胞和死細(xì)胞染色，可用于同時對活細(xì)胞和死細(xì)胞進(jìn)行熒光染色。? ? ?

鈣黃綠素-AM Calcein-AM 應(yīng)用：

Calcein-AM 探針可用于對活細(xì)胞進(jìn)行染色，并已觀察到在細(xì)胞質(zhì)雪旺氏細(xì)胞中發(fā)出亮綠色熒光。 據(jù)文獻(xiàn)記錄，鈣黃綠素-AM 是 Mdr（P-糖蛋白 (Pgp) 和多藥耐藥蛋白 (MRP)）的中性底物，并已用于流式細(xì)胞術(shù)研究以分析 P-gp 和 MRP 的功能。 研究表明，鈣黃綠素-AM 可用于檢測 MDR 介導(dǎo)的耐藥性，并可通過 PGP 從質(zhì)膜轉(zhuǎn)運(yùn)。 線粒體通透性研究利用鈣黃綠素-AM 作為細(xì)胞溶質(zhì)熒光團(tuán)。 Calcein-AM 已被用作線粒體通透性研究中的細(xì)胞溶質(zhì)熒光團(tuán)，以對孔轉(zhuǎn)換進(jìn)行成像。

Calcein-AM 使用方法：

1. 用 DMSO 制備1mM 的 Calcein, AM溶液后，再采用 PBS 將其稀釋制成為 1～50 μM 的Calcein, AM溶液。

2. 其次再將 1/10的細(xì)胞培養(yǎng)基體積的 Calcein, AM溶液 加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中。

3. 在37℃恒溫條件下，培養(yǎng)細(xì)胞約 15～30分鐘。

4. 采用 PBS 或 適當(dāng)?shù)木彌_液洗滌細(xì)胞兩次。

5. 使用490nm激發(fā)波長，515 nm發(fā)射波長濾光片的熒光顯微鏡進(jìn)行觀察細(xì)胞。

? ? ? ※ 如果 Calcein, AM 很難進(jìn)入細(xì)胞，可以使用表面活性劑，例如：Pluronic F127。

? ? ? ※ 也可以用 1/10濃度的Calcein, AM溶液 代替培養(yǎng)基。

案例：

Confocal laser scanning microscope (CLSM) images of calcein-AM (green) and propidium iodide (red and yellow) (貨號：YZM018808 )stained hepatocytes after 3 days of culture on different substrates.見圖！

光譜圖：