將熒光母素（fluorescamine)加入鱟試劑中，可使參與凝膠反應(yīng)的蛋白分子被熒光素標(biāo)記上。在形成凝膠的過程中，由于蛋白分子產(chǎn)生聚合結(jié)構(gòu)變化，結(jié)合于蛋白的熒光素因部分蛋白隨水分子運(yùn)動(dòng)而同時(shí)發(fā)生旋轉(zhuǎn)，導(dǎo)致熒光偏光度發(fā)生變化。令熒光偏光度為P，垂直熒光強(qiáng)度為I1，水平熒光強(qiáng)度為I2，則可見Р值由于凝膠化而增加，其值可按下式求得如下圖:

?Р值與標(biāo)本中內(nèi)毒素的含量呈線性關(guān)系。

實(shí)驗(yàn)時(shí)所用的熒光母素濃度常為0.02%。因?yàn)闊晒饽杆貪舛仍?.05%以上時(shí)，聚合反應(yīng)有明顯的抑制，0.025%有輕微的抑制作用。

鱟試劑凝膠化，可以使P值增大，其反應(yīng)潛伏期的長(zhǎng)短與P值增大的程度取決于內(nèi)毒素的濃度。當(dāng)內(nèi)毒素在10-2μg/ml時(shí)，5分鐘內(nèi)P值開始增大，而10-3μg /ml時(shí)，則在30分鐘仍看不出P值的增大，當(dāng)內(nèi)毒素<10-3μg /ml時(shí)，濃度越小潛伏期越長(zhǎng)。從而形成了P值上升的圖像，據(jù)此可求出回歸直線方程。

設(shè)傾斜度為b，潛伏期為t?，計(jì)算b/t值。如按不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素計(jì)算結(jié)果繪成曲線，可見內(nèi)毒素在10-8～10-3μg /ml范圍內(nèi)呈上升型直線，其相關(guān)系數(shù)為0.9804，方程式為:

Y = 0.0207 + 0.0797x

(R = 0.9804)

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可求出被檢標(biāo)本中內(nèi)毒素的含量。

本試驗(yàn)的操作均在0℃進(jìn)行，測(cè)定時(shí)則在25℃進(jìn)行。應(yīng)觀察60分鐘內(nèi)反應(yīng)的全過程，每隔5分鐘測(cè)定一次。

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本文節(jié)選自：《內(nèi)毒素的檢測(cè)與鱟實(shí)驗(yàn)（二）》，文章作者：余慶。如有侵權(quán)，請(qǐng)聯(lián)系刪除，謝謝！