SILAC蛋白組或SILAC定量蛋白組學(xué)，是指利用SILAC技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)組進(jìn)行定量研究。百泰派克生物科技提供基于SILAC標(biāo)記的定量蛋白組分析服務(wù)。

SILAC

在基于質(zhì)譜(MS)的定量蛋白質(zhì)組學(xué)中，SILAC（Stable Isotope Labeling By Amino Acids In Cell Culture）是通過在細(xì)胞培養(yǎng)過程中加入穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸對(duì)樣品進(jìn)行標(biāo)記后結(jié)合質(zhì)譜檢測(cè)，對(duì)樣品進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析的方式是一種簡(jiǎn)單、可靠而又強(qiáng)大的方法。SILAC通過正常代謝過程對(duì)細(xì)胞蛋白進(jìn)行標(biāo)記，在新合成的蛋白質(zhì)中加入非放射性的、穩(wěn)定的含同位素的氨基酸。SILAC提供了準(zhǔn)確的相對(duì)定量，不需要任何化學(xué)衍生或操作，即可實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)組學(xué)分析。SILAC屬于體內(nèi)標(biāo)記技術(shù)，使樣品更接近自然狀態(tài)，其標(biāo)記效率高達(dá)100%，且標(biāo)記效果穩(wěn)定，適合于全細(xì)胞蛋白分析，以及膜蛋白的鑒定和定量，每個(gè)樣本只需要幾十微克的蛋白量。

SILAC蛋白組分析

SILAC定量蛋白組分析的實(shí)驗(yàn)流程是：在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入輕、中或重型穩(wěn)定同位素標(biāo)記的必需氨基酸賴氨酸(Lys)和精氨酸(Arg)，在細(xì)胞生長(zhǎng)過程中，新合成的蛋白質(zhì)帶上穩(wěn)定同位素標(biāo)簽。培養(yǎng)一段時(shí)間后，等量混合細(xì)胞培養(yǎng)物中各類型蛋白質(zhì)，酶解后進(jìn)行質(zhì)譜分析。由于質(zhì)量差異，可以在質(zhì)譜儀中區(qū)分帶有不同穩(wěn)定同位素組成的化學(xué)性質(zhì)相同的肽對(duì)。通過比較一級(jí)質(zhì)譜圖中不帶標(biāo)記和帶同位素標(biāo)記的質(zhì)譜峰型的面積大小即可進(jìn)行相對(duì)定量，同時(shí)二級(jí)譜圖還可以對(duì)肽段進(jìn)行序列測(cè)定從而進(jìn)行蛋白鑒定。