您是否總是遇到細(xì)胞抱團的現(xiàn)象？

您是否總是因為搞不清楚細(xì)胞抱團原因而困惑？
您是否總是因為難以將抱團細(xì)胞拯救回來而抓狂

伙伴們，我來拯救你們的細(xì)胞了，今天我給大家從四個層面剖析細(xì)胞抱團的真實原因，快來圍觀吧！

一、細(xì)胞本身生長特性?有抱團傾向

有些細(xì)胞本身有抱團生長的特性，給大家看5種喜歡抱團的細(xì)胞類型：

細(xì)胞類型1：NCI-H716 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣
生長特性：懸浮生長

細(xì)胞喜歡在懸浮液中呈葡萄狀聚集，抱團細(xì)胞粒粒飽滿

細(xì)胞類型2：Caco-2人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
形態(tài)：上皮樣
生長特性：貼壁生長

此細(xì)胞喜歡貼壁成片分布，呈融合狀，細(xì)胞個頭大小不勻

細(xì)胞類型3：CaLu-3 人肺癌細(xì)胞
形態(tài)：上皮樣
生長特性：貼壁生長

此細(xì)胞也是喜歡聚集分布，呈片狀，片狀之間有空白

細(xì)胞類型4：SH-SY5Y人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
形態(tài)：上皮樣
生長特性：貼壁和懸浮生長

此細(xì)胞貼壁居多，有輕微的抱團傾向

細(xì)胞類型5：BT-474人乳腺癌細(xì)胞
形態(tài)：上皮樣
生長特性：貼壁、片狀生長

此細(xì)胞也是喜歡片狀生長

看了這么多喜歡抱團的細(xì)胞類型，也會有喜歡分散生長的細(xì)胞類型吧，來給大家展示2種細(xì)胞類型：

細(xì)胞類型1：MSC（人源脂肪來源）
形態(tài)：成纖維樣
生長特性：貼壁生長

此細(xì)胞成纖維樣，均勻分布，平鋪皿底，不留空隙

細(xì)胞類型2：HEF小兒包皮成纖維細(xì)胞（人源脂肪來源）
形態(tài)：成纖維樣
生長特性：貼壁生長

此細(xì)胞也是喜歡分散生長，均勻分布

Q?如何區(qū)分細(xì)胞抱團正不正常

A：

看了這些細(xì)胞形態(tài)，不知您是否和我有一個共鳴：大多數(shù)上皮樣或神經(jīng)母細(xì)胞瘤樣的細(xì)胞更喜歡抱團生長，而大多數(shù)成纖維樣細(xì)胞更喜歡分散、均勻生長。

又有一個問題來了，那就是我們?nèi)绾螀^(qū)分細(xì)胞抱團正不正常。

這里開始劃重點了，大家看好了：

1.如果細(xì)胞本身是分散生長，結(jié)果抱團嚴(yán)重，說明細(xì)胞“生病”了，我們要給細(xì)胞“診治”。

2.如果本身生長特性就有抱團的細(xì)胞，如何判斷它的抱團正不正常呢？

獨門秘訣告訴您，細(xì)胞哪怕是抱團了，也是“粒粒飽滿，棱角分明”的，回頭看看上面抱團的細(xì)胞，是不是細(xì)胞之間有明確的“分界線”，這說明它們抱在一起很健康，很Happy；而異常的細(xì)胞抱團，你是觀察不到細(xì)胞之間的“界限”的，細(xì)胞形態(tài)也不規(guī)則，邊緣模糊，遠(yuǎn)遠(yuǎn)看去，抱團的細(xì)胞像“一團漿糊”。

二、細(xì)胞老化?更容易抱團

細(xì)胞類型：MSC(人源臍帶來源第6代）
形態(tài)：成纖維樣
生長特性：貼壁生長

如圖所示：人臍帶來源第6代的間充質(zhì)干細(xì)胞，白色箭頭指示的是發(fā)生細(xì)胞老化的MSC細(xì)胞，β-半乳糖苷酶染色陽性，染上藍(lán)色。由圖片可以看出老化細(xì)胞體積增大、細(xì)胞扁平。白圈圈起來的是聚團細(xì)胞，老化細(xì)胞容易聚團生長，狀態(tài)變差。

三、血清批間差?可能導(dǎo)致細(xì)胞抱團

那么問題來了，血清為何有批間差？

因為血清來源于動物，其組成成分有1000種左右，且血清組成及含量常隨供血動物的年齡、生理條件和營養(yǎng)條件而異。每個批號的組分百分比含量都是不固定的，所以批間差異是存在的。

血清批間差可能會導(dǎo)致細(xì)胞抱團

如圖所示，大鼠心肌細(xì)胞在更換了新批次的血清之后，隨著傳代次數(shù)的增加，抱團明顯。正常低密度下，細(xì)胞舒展開來，均勻分散，但異常的的細(xì)胞會呈現(xiàn)聚集生長狀態(tài)，高密度下正常細(xì)胞像鋪路石一樣均勻鋪滿，不留空隙，但高密度下異常的細(xì)胞，形態(tài)模糊，難以辨認(rèn)，像四川九寨溝一樣的溝壑重生。

四、胰酶消化不當(dāng)?容易導(dǎo)致細(xì)胞抱團

導(dǎo)致細(xì)胞抱團的第一種情況是胰酶消化操作不當(dāng)。

如果您經(jīng)常遇到傳代的細(xì)胞貼壁后老是貼壁不勻，成片分布，抱團生長，來看看你有沒有注意這幾個細(xì)節(jié)噢。

1、如圖所示，HEK 293因消化過度或吹打過猛導(dǎo)致細(xì)胞受傷嚴(yán)重，破損的細(xì)胞碎片容易粘連抱團；

2、消化時細(xì)胞融合率太高，成片脫落，將不容易被吹散，容易抱團，我們建議細(xì)胞融合率達(dá)到80%傳代為佳；

3、吹打力度不足，難以將成片脫落的細(xì)胞吹散，容易抱團。

導(dǎo)致細(xì)胞抱團的第二種情況是細(xì)胞對胰酶消化強度和純度的敏感性。

1.細(xì)胞對胰酶消化強度的敏感性。絕大多數(shù)細(xì)胞都可以適應(yīng)普通胰酶。這里的EDTA能螯合掉培養(yǎng)液中的Ca2+、Mg2+，加快細(xì)胞與皿底以及細(xì)胞之間的分離速度。但有極少部分細(xì)胞對胰酶消化強度很敏感，需要不含EDTA的胰蛋白酶，例如：大鼠肺泡二型上皮細(xì)胞。

2.細(xì)胞對胰酶純度的敏感性。胰蛋白酶主要是從豬的胰臟提取，純化獲得的結(jié)晶，再制成的凍干制劑。正是因為其是提取物，故純度無法媲美重組胰酶，含有的雜酶比如羧肽酶對細(xì)胞有傷害，敏感的細(xì)胞類型如神經(jīng)元類：小鼠海馬神經(jīng)元HT22；干細(xì)胞類：胚干，誘導(dǎo)干；間充質(zhì)干需要用重組胰酶消化。

來源：環(huán)凱(huankai.com)轉(zhuǎn)載“逍鵬生物”公眾號,作者VivaCell&BI市場
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