FITC，英文全稱Fluorescein Isothiocyanate，中文名稱異硫氰酸熒光素，具有高吸收率、優(yōu)良的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性等特點，是生物學(xué)中應(yīng)用廣泛的一種綠色熒光素衍生物，其異硫氰酸基團可與蛋白的氨基末端或者伯胺反應(yīng)從而實現(xiàn)包括抗體，凝集素在內(nèi)的蛋白標(biāo)記。除了用作蛋白質(zhì)標(biāo)記物，還可用作蛋白質(zhì)熒光示蹤劑，標(biāo)記抗體用以快速鑒定病原體，以及用于蛋白質(zhì)和多肽（HPLC）的微量測序。FITC為黃-橙色粉末，激發(fā)波長為494 nm。一旦激發(fā)，在發(fā)射波長520 nm處呈黃-綠色熒光。

FITC有兩種異構(gòu)體，異構(gòu)體I（Isomer I）和異構(gòu)體II（Isomer II）,二者在光譜性質(zhì)上基本沒有差異（無論是波長還是光強度），但是前者更易純化，所以相對便宜，應(yīng)用也較為廣泛。對于大部分應(yīng)用，混合型的FITC已能很好的滿足實驗要求。本品Isomer I含量≥90%，適合用于蛋白質(zhì)標(biāo)記。

?標(biāo)記蛋白

1）制備溶于0.1 M碳酸鈉緩沖液（pH 9）的待交聯(lián)蛋白樣品，濃度≥2 mg/mL。

2）溶解FITC于無水DMSO配制成濃度為1 mg/mL的溶液。

3）對于1 mL 蛋白溶液加入50 μLFITC溶液，可按照每次5 μL的量邊加邊輕輕攪拌蛋白溶液；

4）待所需FITC加入完畢，將反應(yīng)液于4℃避光孵育8 h；

5）加入NH4Cl使其終濃度至50 mM，4℃終止反應(yīng)2 h；

6）加入二甲苯青至濃度0.1%，甘油至濃度5%；?????????

7）通過大小孔徑合適的凝膠過濾層析分離排除未被結(jié)合的FITC，分離范圍在20，000至50，000（球蛋白例如抗體）。待凝膠柱平衡后，將以上反應(yīng)混合液從柱頂注入，打開凝膠柱，待其全部流入柱床后，加入PBS緩沖液。

8）于4℃避光儲存上述偶聯(lián)物，加入0.1%（w/v）疊氮化鈉作為一種防腐劑。若蛋白濃度較低（＜1 mg/mL），可加入1%BSA作為一種蛋白穩(wěn)定劑。

9）偶聯(lián)物中熒光素和蛋白的比值（F/P）可通過測定495 nm和280 nm處的吸光值來鑒定，F(xiàn)/P應(yīng)位于0.3-1.0。小于該比例則信號太低，高于該比例則背景太高。

我們可以提供以下熒光染料標(biāo)記蛋白：熒光素FITC、羅丹明、辣根酶HRP、生物素Biotin、Cy7、Cy5、Cy3、Cy5.5、ICG吲哚菁綠標(biāo)記酪蛋白Casein、雙花扁豆凝集素(DBA)、美洲商陸凝集素(PWM)、麥胚凝集素WGA、大豆凝集素（SBA）、花生凝集素Peanut Agglutinin(PNA)、泛素（Ub）、相思子毒素（AT）、鏈霉親和素Streptavidin（SA）、親和素Avidin、蛋白A（Protein A）、重組蛋白G、刀豆球蛋白A(Con A)、蓖麻毒素Ricin Toxin(RT)、胰島素Insulin(Ins)、人轉(zhuǎn)鐵蛋白Transferrin、人血清白蛋白HSA、牛血清白蛋白BSA、雞卵白蛋白OVA.?

相關(guān)產(chǎn)品：

Casein-PEG-TRITC 絡(luò)蛋白-聚乙二醇-四甲基羅丹明

Casein-PEG-6-FAM 絡(luò)蛋白-聚乙二醇-6-羧甲基熒光素

Casein-PEG-FITC 絡(luò)蛋白-聚乙二醇-異硫氰基熒光素

Casein-PEG-Cyanine3 絡(luò)蛋白-聚乙二醇-菁染料CY3

Casein-PEG-Cyanine5 絡(luò)蛋白-聚乙二醇-菁染料CY5

Casein-PEG-Cyanine5.5 絡(luò)蛋白-聚乙二醇-菁染料CY5.5

Casein-PEG-Cyanine7 絡(luò)蛋白-聚乙二醇-菁染料CY7

Casein-PEG-Cyanine7.5 絡(luò)蛋白-聚乙二醇-菁染料CY7.5

Casein-PEG-Rhodamine B 絡(luò)蛋白-聚乙二醇-羅丹明B

Casein-PEG-Indocyanine green 絡(luò)蛋白-聚乙二醇-吲哚菁綠

Casein-PEG-Comarin 絡(luò)蛋白-聚乙二醇-香豆素

QY小編zyl2022.11.30