chelex-100(作用、合成、溶液制備)
Chelex 100 是來自 Bio-Rad的螯合材料,用于通過離子交換純化其他化合物。值得注意的是其結合過渡金屬離子的能力。
它是一種含有亞氨基二乙酸基團的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物。
通過用少量 2 M 硝酸洗脫樹脂獲得金屬的濃縮溶液,硝酸使亞氨基二乙酸酯基團質子化。
Chelex 樹脂通常用于 DNA 提取,通過與包括 Mg2+ 在內的陽離子結合來準備聚合酶鏈式反應,Mg2+ 是 DNA 酶的重要輔助因子。 Chelex 保護樣品免受煮沸后可能保持活性并隨后可能降解 DNA 的 DNA 酶的影響,使其不適合 PCR。煮沸后,Chelex-DNA 制劑穩(wěn)定,可在 4°C 下保存 3-4 個月。極性樹脂珠在打開細胞后與極性細胞成分結合,而 DNA 和 RNA 則保留在 Chelex 樹脂上方的水溶液中。
然而,加熱步驟確實使雙螺旋變性,并且由此產生的單鏈 DNA 在儲存中不太穩(wěn)定。
Chelex 100 有什么作用?
Chelex 100 分子生物學級樹脂可用于從多種樣品類型(包括細胞培養(yǎng)物、血液和組織)中快速、輕松地制備核酸。 使用 Chelex 100 制備的 DNA 和 RNA 適用于通過 PCR、RT-PCR、ddPCR 或 LAMP 進行檢測。
Chelex 樹脂通常用于 DNA 提取,通過與包括 Mg2+ 在內的陽離子結合來準備聚合酶鏈式反應,Mg2+ 是 DNA 酶的重要輔助因子。
Chelex 是由什么制成的?
Chelex 100 樹脂由含有配對亞氨基二乙酸根離子的苯乙烯二乙烯基苯共聚物制成,這些離子在結合多價金屬離子時充當螯合基團。
如何配制Chelex溶液?
將 9 g NaCl (mw 58.44) 溶解在干凈容器中的 700 ml 去離子水或蒸餾水中。
在室溫下儲存(3 個月)。
1.稱出 1 g Chelex 100(100-200 目,來自 BioRad 的鈉形式)。
2.將 50 mM Tris 添加到干燥的 Chelex 中,制成 10 ml 溶液。
3.使用 4 N NaOH 將 pH 值調節(jié)至 11。