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脫氧核糖核酸酶 (DNase) 測(cè)試 - 原理、程序、用途、結(jié)果解釋

2022-10-20 16:48 作者:biofount科研試劑  | 我要投稿

進(jìn)行脫氧核糖核酸酶 (DNase) 測(cè)試以了解生物體水解 DNA 并將其用作碳源的能力,而碳源又將用作生物體生長(zhǎng)的能量。

一種 DNase 瓊脂培養(yǎng)基,呈淡綠色,主要用作差異培養(yǎng)基。 它具有細(xì)菌生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)。

如果培養(yǎng)基中的有機(jī)體將 DNA 分解成更小的片段,它就有能力產(chǎn)生脫氧核糖核酸酶。 DNA 分解的一個(gè)指標(biāo)是它不與甲基綠結(jié)合。 顏色最終會(huì)消失,您會(huì)注意到菌落周?chē)幸粋€(gè)無(wú)色區(qū)域。

圖1:DNA水解測(cè)試; A象限和B象限呈陽(yáng)性,而C象限呈陰性。

圖2:陽(yáng)性 DNase 測(cè)試的特點(diǎn)是接種線(xiàn)周?chē)幸粋€(gè)清晰的區(qū)域。 如果瓊脂始終保持綠色和透明,則測(cè)試為陰性

DNase Test 的用途是什么?

進(jìn)行它是為了找出生物體水解脫氧核糖核酸的能力。

它有助于區(qū)分具有產(chǎn)生脫氧核糖核酸酶能力的金黃色葡萄球菌和其他不具有產(chǎn)生 DNase 能力的葡萄球菌。

它可用于進(jìn)行凝固酶測(cè)試,尤其是在沒(méi)有血漿時(shí)。 它也是比凝固酶測(cè)試更可靠的測(cè)試,因?yàn)橛袝r(shí)凝固酶測(cè)試的結(jié)果難以解釋。

它能夠區(qū)分卡他支原體與人類(lèi)來(lái)源的革蘭氏陰性雙球菌,如淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌。

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

媒介

  • DNase瓊脂(含甲基綠指示劑)

試劑

  • 鹽酸,但僅在介質(zhì)沒(méi)有指示劑時(shí)使用。

  • 本生燈

  • 接種環(huán)

脫氧核糖核酸酶 (DNase) 測(cè)試如何進(jìn)行?

注意:確保瓊脂板表面清潔干燥。 通過(guò)簡(jiǎn)單地在板上畫(huà)線(xiàn)將瓊脂板分成三部分。

圖 3:板的左側(cè)測(cè)試為陰性,而右側(cè)的 DNase 測(cè)試測(cè)試為陽(yáng)性。

接種

接種可以通過(guò)兩種方式進(jìn)行。

1.點(diǎn)接種——使用一個(gè)環(huán),接觸一個(gè)有機(jī)體菌落并接種到盤(pán)子的一小塊區(qū)域上。 它通常放置在板的一個(gè)部分的中心。 孵化后,您會(huì)注意到直徑約 10 毫米的厚斑塊的生長(zhǎng)。 將板在 37 攝氏度下孵育至少 24 小時(shí)。

2.條帶/線(xiàn)條紋接種 – 使用大量約 4 厘米長(zhǎng)的接種物畫(huà)一條線(xiàn)。 從邊緣開(kāi)始,直到瓊脂板的中心。 在 37 攝氏度的溫度下孵育至少 24 小時(shí)。

注意:如果您使用的介質(zhì)沒(méi)有指示劑,您需要做的是加入足量的 1N 鹽酸。 讓它在那里靜置幾分鐘,以便試劑可以完全吸收到板中。 幾分鐘后,在深色背景下檢查板。

結(jié)果解釋

陽(yáng)性

陽(yáng)性結(jié)果的特征是測(cè)試生物體周?chē)袩o(wú)色介質(zhì)。 這意味著被測(cè)試的生物體具有水解 DNA 的能力。 DNase 測(cè)試陽(yáng)性生物的例子有:

  • 金黃色葡萄球菌

  • 粘質(zhì)沙雷氏菌

  • M.卡他哈利斯

  • 一些空腸彎曲桿菌菌株?

陰性

如果介質(zhì)的顏色(綠色)保持不變,則測(cè)試為陰性。 它只是意味著被測(cè)試的生物體沒(méi)有水解 DNA 的能力。 例子是:

  • 表皮葡萄球菌

  • 淋病奈瑟菌


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