DAPI是一種可對(duì)DNA?染色的細(xì)胞核染色試劑，常用于細(xì)胞凋亡檢測。

DAPI染色原理

DAPI是含有特定AT序列DNA的一種嵌入劑，它能像Hoechst染料一樣粘附在DNA雙螺旋的小溝區(qū)。盡管DAPI不能通過活細(xì)胞膜，但卻能穿透擾亂的細(xì)胞膜而對(duì)細(xì)胞核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用來檢測酵母線粒體DNA，葉綠體DNA，病毒DNA，microplasm ?DNA以及染色體DNA。DAPI-DNA復(fù)合物的激發(fā)和發(fā)射波長分別為360 nm和460 nm。? ??

DAPI染色步驟

1. 用1mL 的 ddH2O 將 DAPI進(jìn)行溶解，制成為： 2.9mM 的 DAPI溶液（1mg DAPI：1mL H2O）。?
備注：DAPI 不能直接采用 PBS 等緩沖溶液進(jìn)行溶解，需要先用水將其溶解。?
2. 取適量?DAPI水溶液 加到 PBS緩沖液中，制成：10~50μM 的 DAPI溶液， 推薦采用：PBS配制方法： 使用 8.00g,NaCl; 0.20g KCl; 2.9g Na2HPO4·12H2O 以及0.2g KH2PO4溶解于1L純水中。?
3. 將1/10體積培養(yǎng)基的 DAPI溶液 加入細(xì)胞培養(yǎng)基中，也可以采用 1/10濃度 的 DAPI緩沖液 替代培養(yǎng)基使用。
4. 在37℃恒溫條件下培養(yǎng)細(xì)胞約 10~20 分鐘之間。
5. 用?PBS 或者 合適的緩沖液洗兩次細(xì)胞。
6. 用帶有?360nm激發(fā)波長 和 460nm發(fā)射波長的濾光片的熒光顯微鏡進(jìn)行觀察細(xì)胞。

dapi染料的激發(fā)光波長和發(fā)射光波長光譜圖：