BODIPY 581/591 C11是脂質(zhì)氧化 (lipid oxidation) 的熒光比值探針，可用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞膜中的活性氧 (ROS)。染料的多不飽和丁間二烯基氧化后會(huì)導(dǎo)致熒光發(fā)射峰從約590 nm 偏移至 約510 nm。BODIPY581/591 也是一種常用于鐵死亡研究的產(chǎn)品。

圖1.BODIPY 581/591 C11化學(xué)結(jié)構(gòu)

BODIPY581/591 C11?使用方法（活細(xì)胞成像分析）

1、染色工作液的準(zhǔn)備

a.儲(chǔ)存液的制備：將低溫保存的 C11 BODIPY 581/591 干粉從冰箱取出后置于室溫至少 20min，低速離心后，加入高質(zhì)量 DMSO 配制成適宜濃度的儲(chǔ)存液，根據(jù)單次用量分裝，≤-20℃保存，盡量避免反復(fù)凍融。

b. 工作液的制備：C11 BODIPY 581/591 用于活細(xì)胞染色的建議工作濃度一般是 1-10 μM，請(qǐng)根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，參閱文獻(xiàn)，確定最佳工作濃度。用培養(yǎng)基或生理緩沖液稀釋 10mM 儲(chǔ)存液到所需的工作濃度，注意現(xiàn)配現(xiàn)用！

2. 染色步驟

a. 細(xì)胞鋪板，37℃孵育過(guò)夜；

b. 用待研究藥物處理細(xì)胞；

c.加入一定量的 10mM C11 BODIPY 581/591 儲(chǔ)存液使其終濃度達(dá)到10μM（或做下濃度優(yōu)化，測(cè)定幾個(gè)濃度梯度）。37℃孵育 30min。

d.吸走培養(yǎng)基，然后使用 PBS 清洗三次；

e.使用熒光顯微鏡測(cè)定熒光。還原態(tài)染料使用Ex/Em=581/591nm（Texas Red 濾片）；氧化態(tài)染料使用Ex/Em=488/510nm（FITC濾片）來(lái)測(cè)定。

f.在590m/510nm 發(fā)射光下測(cè)定的熒光讀數(shù)比值反映細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化水平。

3. 圖像處理和分析

分別使用Texas Red(590nm)和 FITC（510nm）發(fā)射濾片來(lái)進(jìn)行熒光成像。

通過(guò)定量熒光強(qiáng)度和計(jì)算分別在 Texas Red(590nm)和 FITC（510nm）通道下測(cè)定熒光得比值來(lái)反映過(guò)氧化水平。

圖2.BODIPY 581/591 C11熒光圖譜