體外診斷試劑注冊申報(bào)資料鉤狀效應(yīng)/HOOK效應(yīng)研究

1 概述

鉤狀效應(yīng)即HOOK效應(yīng)，是指由于抗原抗體比例不合適而導(dǎo)致假陰性的現(xiàn)象，其中抗體過量叫做前帶效應(yīng)；抗原過量叫做后帶效應(yīng)。

抗原抗體特異性反應(yīng)時(shí)，生成結(jié)合物的量與反應(yīng)物的濃度有關(guān)。無論在一定量的抗體中加入不同量的抗原或在一定量的抗原中加入不同量的抗體，均可發(fā)現(xiàn)只有在兩者分子比例合適時(shí)才出現(xiàn)最強(qiáng)的抗原-抗體反應(yīng)。

2 試驗(yàn)要求及方法

試驗(yàn)要求：

檢測濃度從0至超出線性范圍外的樣本，以理論值為X軸，測量值為Y軸，分段進(jìn)行回歸分析，斜率及相關(guān)系數(shù)95%CI包括0的區(qū)段（即隨樣品濃度增大，測量值不再增加）為鉤狀效應(yīng)區(qū)間。

試驗(yàn)方法：

選取含被測物的高值血漿（EDTA-Na抗凝）樣本，必要時(shí)可添加被分析物的純品，并計(jì)算出理論值。使用混合血清或5%牛血清白蛋白生理鹽水溶液或測定方法要求的稀釋液對高值待測樣本進(jìn)行稀釋，稀釋后的標(biāo)本用對照試劑盒檢測確定濃度（即下表中的標(biāo)示值），然后用待測試劑盒重復(fù)測量3次，求平均值對理論濃度的相對偏差

3 試驗(yàn)結(jié)果

批號1鉤狀效應(yīng)測試結(jié)果（單位：ng/ml）

批號2和批號3數(shù)據(jù)略。

①以理論值為X軸，測量值為Y軸，繪制測量結(jié)果趨勢圖，如下：

?

②通過上述趨勢圖，在10-100ng/mL濃度范圍內(nèi)，理論值與測量值有較好的一致性，進(jìn)行回歸及方差分析，結(jié)果如下：

在該濃度區(qū)間內(nèi)，理論值與測量值間有良好的線性關(guān)系，且斜率的95%CI包括1，截距的95%CI包括0，即理論值與測量值有較好的一致性，不存在比例誤差和恒定誤差，與線性范圍研究結(jié)果一致。

③通過上述趨勢圖，在110-150ng/mL濃度范圍內(nèi)，理論值與測量值存在一定的偏差，進(jìn)行回歸及方差分析，結(jié)果如下：

在該濃度區(qū)間內(nèi)，理論值與測量值間有良好的線性關(guān)系，但斜率的95%CI不包括1，截距的95%CI不包括0，即理論值與測量值不具一致性，存在比例偏差和恒定偏差。

④通過上述趨勢圖，在160-240ng/mL濃度范圍內(nèi)，檢測結(jié)果趨于恒定，進(jìn)行回歸及方差分析，結(jié)果如下：

在該濃度區(qū)間內(nèi)，斜率的95%CI包括0，相關(guān)系數(shù)的95%CI包括0，即隨著理論值的增加，測量結(jié)果呈一條與X軸平行的直線，即該濃度區(qū)間內(nèi)，測量值結(jié)果保持相對恒定，測量值與理論值不再存在相關(guān)性，發(fā)生明顯的鉤狀效應(yīng)。

⑤通過上述趨勢圖，在>240ng/mL濃度范圍內(nèi)，檢測結(jié)果呈下降局勢，進(jìn)行回歸及方差分析，結(jié)果如下：

回歸分析斜率<0，從統(tǒng)計(jì)分析角度說明，在>240ng/mL濃度范圍內(nèi)，檢測結(jié)果呈下降局勢。

4 小結(jié)

通過3批產(chǎn)品測試及分析結(jié)果得出，當(dāng)樣本濃度160~240ng/mL時(shí)，斜率及相關(guān)系數(shù)95%CI包括0，檢測結(jié)果不再隨被測物濃度增加而增加，呈現(xiàn)飽和狀態(tài)，當(dāng)樣本濃度>240ng/mL時(shí)，斜率為負(fù)值，檢測結(jié)果再隨被測物濃度增加呈現(xiàn)下降趨勢，被測物呈現(xiàn)過飽和狀態(tài)。

綜上，即濃度>160ng/mL時(shí)，產(chǎn)品會(huì)產(chǎn)生明顯的鉤狀效應(yīng)。