現(xiàn)在市面上最先進(jìn)的技術(shù)是CRISPR-Cas9技術(shù)，敲除率幾乎做到了100%。

所以下面我以CRISPR-Cas9技術(shù)為前提簡單描述下，

1. 根據(jù)敲除基因序列設(shè)計sgRNA序列，構(gòu)建Cas9-sgRNA敲除載體：需要1周左右

2. 融合PCR擴(kuò)增，獲得重組修復(fù)模板（缺失目的基因部分序列）：需要3-5天

3. 將敲除載體和重組修復(fù)模板共同轉(zhuǎn)染到細(xì)菌內(nèi)

4. Cas9-sgRNA復(fù)合體對目的基因進(jìn)行切割，造成雙鏈斷裂（DSB）

5. 細(xì)菌利用帶有部分目的基因缺失的重組修復(fù)模板對DSB進(jìn)行修復(fù)，獲得目的基因敲除菌株：第三至五條共需1-3周的時間

作者：海星生物? ? ? 公眾號：Cas9X細(xì)胞基因編輯

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