艾美捷游離巰基檢測(cè)試劑盒提供了一個(gè)簡便方法檢測(cè)血液、尿液、組織勻漿和細(xì)胞裂解液中游離的硫醇.利用一個(gè)專利的熒光指示劑作用于硫醇時(shí)將會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)熒光信號(hào)，以對(duì)應(yīng)硫醇的含量.

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艾美捷游離巰基檢測(cè)試劑盒試劑準(zhǔn)備：

1.硫醇含量測(cè)定緩沖液（10X）-（編號(hào)700341）

小瓶中含有5 ml濃縮含量測(cè)定緩沖液。用45ml HPLC級(jí)水稀釋5ml含量測(cè)定緩沖液濃縮液。該最終緩沖液（100mM磷酸鉀，pH 7.4，含1mM EDTA）應(yīng)用于測(cè)定。當(dāng)儲(chǔ)存在-20°C時(shí)，該稀釋緩沖液可穩(wěn)定六個(gè)月。

2.熒光硫醇檢測(cè)器-（編號(hào)700006）

每個(gè)小瓶含有300μl檢測(cè)器。測(cè)定前，用4.95 ml稀釋的測(cè)定緩沖液稀釋50μl提供的檢測(cè)器。這是足以測(cè)定一個(gè)平板的溶液。該稀釋溶液在室溫下穩(wěn)定一天。盡可能避免暴露在光線下。將未稀釋的檢測(cè)器儲(chǔ)存在-20°C。

3.硫醇-谷胱甘肽標(biāo)準(zhǔn)品-（編號(hào)700343）

小瓶中含有約10mg還原型谷胱甘肽標(biāo)準(zhǔn)品。小心地稱出1 mg并將其溶解在3.25 ml稀釋的硫醇含量測(cè)定緩沖液中。用990μl稀釋的硫醇含量測(cè)定緩沖液稀釋10μl該溶液。該稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為10μM。溶液準(zhǔn)備好用于制備谷胱甘肽標(biāo)準(zhǔn)曲線（見第11頁）。谷胱甘肽標(biāo)準(zhǔn)溶液在室溫下穩(wěn)定一天。

4.巰基半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)品-（編號(hào)700344）

該小瓶含有約10mg半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)品。小心地稱出1 mg并將其溶解在3.06 ml稀釋的硫醇含量測(cè)定緩沖液中。用995μl稀釋的硫醇含量測(cè)定緩沖液稀釋5μl該溶液。該稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為10μM。溶液準(zhǔn)備好用于制備半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線（見第11頁）。半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液在室溫下穩(wěn)定一天。

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艾美捷游離巰基檢測(cè)試劑盒樣品制備：

血漿

1.使用抗凝劑如肝素或檸檬酸鹽收集血液。

2.在4°C下以700-1000 x g離心血液10分鐘。用移液管移走頂部黃色等離子層，而不干擾白色褐黃色層。

3.將血漿儲(chǔ)存在冰上，直到測(cè)定或在-80°C下冷凍。血漿樣品將穩(wěn)定一個(gè)月。應(yīng)避免重復(fù)冷凍/解凍循環(huán)。

4.血漿應(yīng)在分析前用稀釋的測(cè)定緩沖液稀釋1:5。

血清

1.在不使用抗凝劑如肝素或檸檬酸鹽的情況下采集血液。

2.讓血液在25°C下凝結(jié)30分鐘。

3.在4°C下以2000 x g離心血液15分鐘。用移液管移走頂部黃色血清層，不干擾白色血沉棕黃層。

4.將血清儲(chǔ)存在冰上。如果當(dāng)天未進(jìn)行分析，則在-80°C下冷凍。樣品將穩(wěn)定一個(gè)月。應(yīng)避免重復(fù)冷凍/解凍循環(huán)。

5.測(cè)定前，血清應(yīng)用稀釋的測(cè)定緩沖液稀釋1:5。

組織勻漿

1.解剖前，用PBS（磷酸鹽緩沖鹽水）溶液（pH 7.4）沖洗組織，以去除任何紅細(xì)胞和血塊。

2.將組織均勻化在每克組織5-10毫升冷緩沖液（即，100mM Tris-HCl，pH 7.8）中。

3.在4°C下以10000 x g離心15分鐘。

4.取出上清液并儲(chǔ)存在冰上。如果當(dāng)天未進(jìn)行分析，則將樣品儲(chǔ)存在-80°C。樣品將穩(wěn)定至少一個(gè)月。

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游離巰基檢測(cè)試劑盒文獻(xiàn)參考：

1.Wlodek, L. Beneficial and harmful effects of thiols. Polish Journal of Pharmacology 54, 215-223 (2002).

2.Lash, L.H. and Jones, D.P. Distribution of oxidized and reduced forms of glutathione and cysteine in rat plasma. Arch. Biochem. Biophys. 240, 583-592 (1985).

3.Wendel, A. and Cikryt, P. The level and half-life of glutathione in human plasma. FEBS Lett. 120, 209-211 (1980).

4.Dickenson, D., Forman, H. Cellular glutathione and thiols metabolism.

Biochemical Pharmacology 64, 1019-1026 (2002).