ELIspot 檢測是檢測外周血中抗原特異性反應(yīng)數(shù)量的可靠方法。 對于 B 細(xì)胞、CD4+ T 細(xì)胞和 CD8+ T 細(xì)胞，ELIspot 可以提供有關(guān)產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞數(shù)量的信息，而對于 B 細(xì)胞，我們還可以確定產(chǎn)生抗體的特定同種型。

為了同時測量 3 種細(xì)胞因子或 3 種抗體同種型，可以進(jìn)行熒光斑點(diǎn)分析。 這提供了有關(guān)例如的信息。 多功能細(xì)胞（產(chǎn)生 2 種或多種細(xì)胞因子的細(xì)胞）的數(shù)量。

圖1.ELIspot機(jī)制

細(xì)胞首先在抗體包被的表面上培養(yǎng)，無論是否存在目的抗原。 在這種培養(yǎng)過程中，一系列分泌的細(xì)胞因子被結(jié)合到培養(yǎng)表面的抗體捕獲。 在預(yù)先指定的刺激期后，標(biāo)記的檢測抗體將通過酶促反應(yīng)（用于單一檢測）或熒光標(biāo)記（當(dāng)需要檢測多種產(chǎn)品時）使捕獲的細(xì)胞因子可視化。

使用 ELIspot 檢測細(xì)胞因子產(chǎn)生的優(yōu)勢

• 高通量

• 堅(jiān)固且準(zhǔn)確（非常適合臨床測試）

• 一次測試中最多三種細(xì)胞因子（使用 Fluorospot）

通過 ELIspot 檢測細(xì)胞因子的示例

評估 PBMC 樣本中抗原特異性 T 細(xì)胞的數(shù)量

圖2.將 PBMC 解凍并靜置過夜。 隨后，用含有 CMV、EBV、流感和破傷風(fēng)類毒素肽的 CEFT 肽庫刺激細(xì)胞 16 小時。 之后，通過 ELIspot 評估 IFN-γ 的產(chǎn)生。 左圖，未刺激和 CEFT 刺激孔的代表性圖像，右圖，在 CEFT 濃度增加時來自 2 個供體的 IFN-γ 產(chǎn)生細(xì)胞的匯編數(shù)據(jù)（每個條件重復(fù) 3 次，平均計(jì)數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)偏差）。