組成蛋白質(zhì)的多肽鏈不是閉合的，而是鏈狀的化合物，含有兩個(gè)末端，即氨基端（N端）和羧基端（C端）。大量研究表明蛋白質(zhì)的C端和N端有著不同的重要作用：蛋白質(zhì)N端序列與蛋白質(zhì)的壽命和亞細(xì)胞器定位等有密切關(guān)系；C端序列影響蛋白質(zhì)和多肽的空間結(jié)構(gòu)和生物功能。對(duì)蛋白的末端序列進(jìn)行研究有利于蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)分析，從而揭示蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能。?

蛋白質(zhì)C端測(cè)序方法?

蛋白質(zhì)C端測(cè)序的方法主要有羧肽酶法、化學(xué)法和串聯(lián)質(zhì)譜法等。羧肽酶法和化學(xué)法的策略是通過(guò)酶解法或化學(xué)試劑裂解法獲得C端氨基酸，再結(jié)合液相色譜或質(zhì)譜技術(shù)對(duì)氨基酸種類(lèi)進(jìn)行鑒定。串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蛋白質(zhì)C端序列的原理則是將蛋白質(zhì)樣品酶解、消化成肽段混合物，然后對(duì)肽段混合物進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析，通過(guò)一級(jí)質(zhì)譜信息選擇C端肽段離子進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析，再根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)結(jié)合相應(yīng)軟件和數(shù)據(jù)庫(kù)計(jì)算蛋白質(zhì)的C端氨基酸序列。?

蛋白質(zhì)N端測(cè)序方法?

蛋白質(zhì)N端測(cè)序的方法包括傳統(tǒng)的Edman降解法、逆轉(zhuǎn)錄PCR法（RT-PCR）和質(zhì)譜法。Edman降解法要求較高的蛋白質(zhì)或多肽純度，且不能用于N端封閉的蛋白質(zhì)。RT-PCR根據(jù)反轉(zhuǎn)錄得到的DNA，通過(guò)遺傳密碼表來(lái)推演對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，該方法簡(jiǎn)便快速，但不能預(yù)測(cè)由突變或翻譯后加工引起的氨基酸殘基變化，故不能完全真實(shí)的反應(yīng)原蛋白的N端序列。?

蛋白N/C端測(cè)序

質(zhì)譜法可以同時(shí)實(shí)現(xiàn)蛋白N端和C端序列測(cè)序，包括N端封閉和聚乙二醇化蛋白的序列測(cè)定。質(zhì)譜法的靈敏度、準(zhǔn)確度和分辨率都比較高，在蛋白質(zhì)序列分析中的應(yīng)用廣泛。?

百泰派克生物科技基于Thermo公司最新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀提供蛋白質(zhì)末端測(cè)序一站式技術(shù)服務(wù)，用于蛋白或活性多肽N端和C端序列分析，還可用于確認(rèn)重組蛋白表達(dá)情況，如是否完整表達(dá)、表達(dá)過(guò)程是否發(fā)生斷裂以及N端和C端序列是否發(fā)生修飾等。百泰派克生物科技還可根據(jù)需求提供定制化技術(shù)服務(wù)，歡迎免費(fèi)咨詢(xún)。?