摘要：本教程將介紹如何使用DAPI染料對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，涵蓋了所需試劑的配制方法、具體實(shí)驗(yàn)步驟以及注意事項(xiàng)。

DAPI是一種熒光染料，主要用于標(biāo)記細(xì)胞核，便于觀察細(xì)胞核的形態(tài)和數(shù)量。DAPI可作為DNA特異性探針用于流式細(xì)胞儀、染色體染色、組織化學(xué)和生物化學(xué)中的DNA可視化和定量。

一、試劑和配制方法

1. DAPI染料：可以從AbMole生物購(gòu)買目錄號(hào)為M5107的溶液型式，1?mg/mL的濃度。

2. DAPI染料工作液：使用PBS（磷酸鹽緩沖液）或者其他適合的稀釋液，將DAPI儲(chǔ)備液稀釋至1 μg/mL的工作濃度。用于細(xì)胞核染色時(shí)，推薦的DAPI工作濃度為0.5-10μg/ml。

3. 固定液：4%多聚甲醛溶液。

4. 滲透液：0.1% Triton X-100（AbMole，目錄號(hào) M9162）溶液。

5. 封片用的抗褪色劑：可以選擇市售的抗褪色劑，如VECTASHIELD Mounting Medium等。

二、實(shí)驗(yàn)步驟

1. 將細(xì)胞種植在適當(dāng)?shù)妮d玻片或培養(yǎng)皿中，使其達(dá)到適當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)狀態(tài)。

2. 用PBS洗滌細(xì)胞2-3次，每次5分鐘。

3. 向細(xì)胞上加入預(yù)先準(zhǔn)備好的4%多聚甲醛溶液，靜置15-20分鐘以固定細(xì)胞。

4. 用PBS洗滌細(xì)胞2-3次，每次5分鐘。

5. 向細(xì)胞上加入0.1% Triton X-100溶液，靜置5-10分鐘以滲透細(xì)胞。

6. 用PBS洗滌細(xì)胞2-3次，每次5分鐘。

7. 向細(xì)胞上加入1 μg/mL DAPI染料稀釋液，靜置5-10分鐘以染色細(xì)胞核。

8. 用PBS洗滌細(xì)胞2-3次，每次5分鐘。

9. 用抗褪色劑封片，然后使用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞核的形態(tài)和數(shù)量。

三、注意事項(xiàng)

1. DAPI染料具有光敏性，請(qǐng)?jiān)诒芄鈼l件下操作。

2. DAPI染料使用時(shí)，請(qǐng)佩戴實(shí)驗(yàn)室防護(hù)用品，如實(shí)驗(yàn)服、手套和護(hù)目鏡。

3. 操作過(guò)程中注意避免細(xì)胞的污染和損傷。

4. 熒光顯微鏡觀察時(shí)，請(qǐng)使用UV激發(fā)光源，DAPI的熒光發(fā)射波長(zhǎng)為461 nm。

5. 根據(jù)實(shí)際實(shí)驗(yàn)需求，可以將DAPI染料與其他熒光染料或抗體共染，以觀察細(xì)胞核以外的其他細(xì)胞結(jié)構(gòu)。

本操作教程僅供參考，實(shí)際實(shí)驗(yàn)操作請(qǐng)遵循實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程和實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書(shū)。

鳴謝：https://www.abmole.cn/products/dapi-solution.html