細胞轉(zhuǎn)染,簡而言之，就是將外源分子（如DNA,RNA等）導入真核細胞中的一種技術。

分類：

瞬時轉(zhuǎn)染（transient gene expression, TGE）和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(stable gene expression，SGE)兩種。

瞬時轉(zhuǎn)染

指外源 DNA或RNA 轉(zhuǎn)入宿主細胞后不整合到宿主染色體中進行外源目的基因的表達。

特點：

1.目的基因未整合到染色體上，超螺旋質(zhì)粒DNA有較高的轉(zhuǎn)染效率；

2.轉(zhuǎn)染24h-72h后常需要用到一些報告系統(tǒng)如熒光蛋白、β半乳糖苷酶等來幫助檢測；

3.表達持續(xù)時間48-72h,隨細胞分裂而稀釋直至丟失；

4.用于快速分析:如基因產(chǎn)物短期表達、蛋白質(zhì)小規(guī)模表達純化。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染

指外源DNA轉(zhuǎn)入宿主細胞后將外源目的基因整合到宿主染色體中進行表達。

特點：

1.目的基因整合到染色體上，需要使用線性DNA（線性DNA雖然比超螺旋狀的DNA轉(zhuǎn)入量低，但整合率高）；2.外源DNA整合到宿主細胞染色體中大約為1%，通常需要通過一些選擇性標記反復篩選，才能得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細胞系。3.隨宿主細胞基因組復制、轉(zhuǎn)錄、翻譯，并被穩(wěn)定遺傳；4.用于獲得穩(wěn)定表達的外源基因的單細胞克?。喝绱笠?guī)模蛋白質(zhì)的合成，長期的藥理學研究遺傳機制的研究等。

圖1 細胞轉(zhuǎn)染流程圖

細胞轉(zhuǎn)染的方法

物理法：電穿孔法、顯微注射法和基因槍法；

化學法：磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、多種陽離子物質(zhì)介導；

生物法：病毒介導轉(zhuǎn)染、逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒。

一些轉(zhuǎn)染方法方法的比較

圖2 細胞轉(zhuǎn)染的一些常見方法

普健穩(wěn)定細胞株的構建

穩(wěn)定細胞株：一般是將外源DNA克隆到具有某種抗性或者選擇基因的載體上，載體被轉(zhuǎn)染到宿主細胞并整合到染色體中，用載體中所含的選擇標志進行篩選，篩選得到可穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株。

服務內(nèi)容

1. 基因過表達、突變、沉默等科研用穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株構建；

2. 重組抗體，細胞因子等生物藥的穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系前期篩選。

技術流程及周期

1.?重組表達質(zhì)粒構建（1周）

2.?藥物本底濃度測定（2周，可與1同時進行）

3. 細胞轉(zhuǎn)染（1天）

4.?多克隆穩(wěn)定細胞株篩選及鑒定（2-3周）

5.?單克隆穩(wěn)定細胞株篩選及鑒定（3-4周）

6.?穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株產(chǎn)量、活性檢測及穩(wěn)定性研究（根據(jù)客戶需求）

圖3 技術流程圖

服務優(yōu)勢

高質(zhì)：外源基因嚴格鑒定，細胞來源清晰，無污染

高產(chǎn)：重組蛋白/抗體表達量可快速優(yōu)化至2g/L以上穩(wěn)定表達

穩(wěn)定：獨有的GS穩(wěn)轉(zhuǎn)系列載體配合MSX藥物篩選，實現(xiàn)穩(wěn)定傳代15代以上

快速：篩選高產(chǎn)細胞株，周期短至3個月

靈活定制：可針對重組蛋白/抗體全長或片段進行個性化表達

經(jīng)驗豐富：專業(yè)的技術團隊，已成功為國內(nèi)外多家醫(yī)藥公司和研究單位構建交付穩(wěn)定細胞株

多篩選系統(tǒng)：G418/潮霉素/嘌呤霉素篩選系統(tǒng)，GS/DHFR 篩選孵化系統(tǒng)等

案例

穩(wěn)轉(zhuǎn)優(yōu)化前表達量28mg/L

穩(wěn)轉(zhuǎn)優(yōu)化后表達量2.3 g/L