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C18色譜柱出峰分叉,拖尾怎么辦?色譜柱堵塞的解決方案

2020-02-18 13:06 作者:指間的滿天繁星  | 我要投稿

? ? ? ?在實際工作中,如果出現(xiàn)了下面的情況。我們應(yīng)該怎么辦呢?下面介紹一些小技巧,希望能夠幫到大家。


峰形分叉
拖尾

? ? ? ?首先我們要先確定出現(xiàn)這種情況是因為色譜柱的原因,而不是儀器部分造成的。然后才能很好的解決問題哦。雖然主要適用于做添加劑,其他的也可以作為參考咯。條件有限的話,死馬當(dāng)活馬醫(yī)。

? ? ? ?在講之前先說些廢話,添加劑前處理比較簡單,要真正有效的提高色譜柱的使用壽命,盡量都先用濾紙過濾,再用0.45μm或者0.22μm微孔濾膜過濾,再有條件一點的話就加保護柱咯。PS:保護柱價格貴,還得買保護柱套,說實話保護柱也不耐用。

? ? ? ? 就添加劑來說,這種情況大部分都是柱子堵了。注意觀察壓力是不是變大了,有時候明顯,有時候不明顯。因為正常使用被污染的概率不大,除非是做研究而不是平常的檢測樣品。大批量進樣之后,特別容易出現(xiàn)這種情況。下面給大家提供一些可選方案,嘗試著搶救一下。

? ? ? ?首先正常沖柱,除去色譜柱中的緩沖鹽,10%甲醇沖久一點,再換成100%甲醇。

?

下面有幾個方案可選,

? ? ? ?1、將水換成酸,甲酸乙酸都可以,建議用乙酸,因為0.1%的甲酸PH接近2.5了,C18柱都有一個PH使用范圍的,所以太酸了會損壞柱子,0.2%冰乙酸PH大概4.5左右比較合適。然后設(shè)置一個梯度洗脫的程序,時間上面是長一點好。3-4個小時吧!最后再正常沖柱。說實話,這方案效果一般。用乙腈和水梯度沖一沖效果都比這個好。但這種方案對柱子幾乎沒有損傷。

? ? ? 2、下面說的是反沖,顧名思義就是反接色譜柱,因為現(xiàn)在的色譜柱兩頭都有塞板,反沖問題不大,并不會對柱子造成太大的損傷。用甲醇和水梯度反沖都會有一定的效果,如果沒有就換成5+95乙腈和水。無論怎么沖最后都要換100%純有機相沖40分鐘以上。其中最強的洗脫效果要數(shù)75%的乙腈,用這個比例會對柱效有點影響。前面兩種方式無效再用75%乙腈,因為柱子可能不分叉了,但是峰形會沒有原來那么尖銳

? ? 3、上面的第二種方案能解決大部分問題的了,最后這種是真的是死馬當(dāng)活馬醫(yī)了,正接5+95乙腈水,再換100%乙腈,然后換異丙醇0.3ml/min流速過夜,最后換甲醇。

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? ? ?像四氫呋喃,氯仿這種我就不介紹了,真的不建議這樣,說實話,添加劑做不了還可以用來做其他的,因為想甲醇水,乙腈水,之類不是緩沖鹽做流動相的檢測項目挺多的,做這些柱子還是可以用的

? ??

? ? PS:關(guān)于新柱用這個方法沖一沖再使用,壽命會長些。

60%甲醇或乙腈平衡3-4小時,換5%-95%梯度洗脫模式,最后用純甲醇或乙腈保存。之后再使用


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