勃起功能障礙動物模型【動物實驗外包】

【造模機制】勃起功能障礙(erectile dysfunction,ED)研究中用來制作模型的動物根據研究者的目的,經濟條件和各種動物的特點而有所不同,常被選用的動物有大鼠和小鼠,因為其陰莖解剖及勃起時海綿體內生理變化與人類非常相似。貓、犬、兔也可用作 ED模型。

（一)血管性 ED 模型

【造模機制】陰莖勃起的基本血流動力學特征提示:陰莖海編體動脈供血不足可以導致血管性 ED,因此結扎雙側髂內動脈或陰部內動脈可以復制出血管性 ED 的急性模型。

【造模方法】雄性大鼠。通過腹部正中切口暴露血管,在手術顯微鏡下仔細分離髂靜脈直至顯露髂內動脈,然后予以結扎,制作成雙側髂內動脈結扎的大鼠血管性 ED 模型。觀察自主行為及體重,性器官指數和病理改變,性活動(嗅舔次數,爬背次數、累計爬背時間,首次爬背時間）。

【模型特點】證實在結扎后的第 3 天海綿體內壓即明顯降低,而且1 個月后仍不能恢復。

【應用范圍】利用該模型研究某種因子或某種藥物對 ED 的治療效果和作用。

（二）肝氣郁結證小鼠 ED模型

【造模機制】中醫(yī)學認為肝氣郁結是 ED 發(fā)病的主要病理特點。通過建立大鼠肝氣郁結證模型,檢測勃起功能相關指標,驗證肝氣郁結可以導致勃起功能障礙并揭示其發(fā)病機制。

【造模方法】昆明小鼠,體重 23～25g,常規(guī)環(huán)境喂養(yǎng),適應 10 天后開始造模。自備用硬塑料特制的束縛筒,該簡呈管狀,簡口內徑 2.8cm,長約 10cm(可調節(jié)),簡內前端以鋼絲網固定封口,后端為插人式鍍鋅鐵片開關閘門。將肝氣郁結組小鼠固定于以上束縛盒中,并塞人脫脂棉球減少小鼠活動空間,逐日增加棉球量加大束縛強度;第 1～2 天束縛 60 分鐘，每 2 天增加束縛 10 分鐘,通過增強束縛強度和時間消除小鼠對應激的耐受性。造模時間為10 天。在實驗前 3 天,早晨和晚間小鼠活躍期取出擋板,合籠各 2 小時,培養(yǎng)小鼠性經驗,促進其性行為的成熟,第4～10 天以擋板隔離合籠飼養(yǎng)。觀察指標同“血管性 ED 模型”。

【應用范圍】同“血管性 ED 模型”。

【模型評價】本實驗采用束縛盒慢性應激法制造肝氣郁結證 ED 小鼠模型,符合中醫(yī)肝氣郁結證本質特點,小鼠行為狀態(tài)表現與文獻中肝氣郁結證動物模型相一致。

【造模機制】目前研究較多的內分泌性 ED模型是糖尿病大鼠 ED 模型,經典的方法是（三）內分泌性 ED 模型用鏈脲佐菌索(STZ)誘導生成糖尿病大鼠模型,之后用阿樸嗎啡 100μg/kg 觀察糖尿病大鼠的陰莖勃起情況,不勃起則為糖尿病大鼠 ED模型。

【造模方法】1.動物和器材試劑 SD 雄性大鼠,體重 200～250g。鏈脲佐菌素(STZ)、枸櫞酸鈉構櫞酸鹽緩沖液(pF4.5)。血糖儀。每只大鼠進入研究前,均有正常的性功能(由與發(fā)情雌鼠交配證實)。用 0.1mol/L枸橡酸鈉-枸櫞酸鹽緩沖液(pH4.5),在冰水浴中配置 10mg/ml鏈脲佐菌素(STZ),即配即用。

2.模型制備禁食 12 小時,按 60mg/kg 左下腹腔內注射 STZ溶液。第4 天血糖儀測定尾血,血糖≥16.67mmol/L為糖尿病模型。之后將大鼠放在觀察箱中,適應環(huán)境 10分鐘,室內保持安靜,燈光調暗,僅夠觀察即可,然后大鼠頸部背側皮下注射阿樸嗎啡 80pglkg,阿樸嗎啡溶解于 0. 5mg/kg 的維生素 C與生理鹽水中,調整體積為 5ml/kg,每只大鼠于注射后立刻觀察 30 分鐘,不勃起則為糖尿病大鼠 ED模型。

3.觀察指標將大鼠前半身置人圓筒中,后肢固定在夾板上。暴露大鼠陰莖,不另加其他刺激,觀察 30 分鐘內大鼠勃起的總次數。阿樸嗎啡 100μg/kg 觀賽糖尿病大鼠的陰莖勃起情況。若不勃起則認為造模成功。

【模型特點】糖尿病大鼠 ED 模型血糖≥16.67mmol/L,且注射阿樸嗎啡 100pμg/kg時觀察糖尿病大鼠的陰莖不勃起。

【應用范圍】檢測某種藥物對內分泌性 ED的治療作用,也用于研究內分泌性 ED 的發(fā)病機制。

【注意事項】鏈脲佐菌素(STZ)的給藥途徑多樣,可以皮下,腹腔或靜脈給藥,劑量為35～75mg/kg。一般認為比較合適的劑量為 55mg/kg,劑量過大會引起其他器官的損傷導致實驗動物死亡,過小誘發(fā)率降低,造成動物浪費。

【模型評價】糖尿病 ED 動物模型的建立是展開 ED 研究的必備條件。大鼠是在 ED 研究中應用最多的動物,其價格也是常用于 ED 研究的動物中最適宜的,而且其陰莖解剖結構與人有較強的相似性。鏈脲佐菌素(STZ)誘導的模型應用價值最大,操作相對簡單,相對于基因模型,其神經病理改變要明顯,因而得到廣泛應用,最近還用于女性性功能障礙的研究，取得了較多有意義的資料。

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