艾美捷Cas9核酸酶的化學(xué)性質(zhì)和應(yīng)用說(shuō)明
CRISPR/Cas9是細(xì)菌和古細(xì)菌在長(zhǎng)期演化過(guò)程中形成的一種適應(yīng)性免疫防御系統(tǒng)。CRISPR/Cas9系統(tǒng)通過(guò)將入侵噬菌體和質(zhì)粒DNA的片段整合到CRISPR序列中,并利用相應(yīng)的CRISPR RNAs?(crRNAs)來(lái)指導(dǎo)Cas9蛋白對(duì)同源序列的降解,從而提供免疫性。人工改造過(guò)的Cas9/sgRNA系統(tǒng)通過(guò)sgRNA(short guide RNA)引導(dǎo)Cas9蛋白識(shí)別并剪切帶有sgRNA靶點(diǎn)的雙鏈DNA,可用于基因敲除和精確編輯DNA等操作。
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艾美捷Cas9核酸酶——在大腸桿菌中表達(dá)的重組化膿性鏈球菌Cas9(wt)蛋白。
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艾美捷Cas9核酸酶化學(xué)性質(zhì):
形式:液體
制備方法:E。大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)
純度:≥?SDS-PAGE顯示95%
活性:20 nM CRISPR/Cas9-C-NLS核酸酶在37℃下孵育1小時(shí),通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定,底物DNA的消化率為90%。
推薦用途:CRISPR基因組編輯
最佳工作稀釋度應(yīng)由最終用戶確定。
儲(chǔ)存緩沖液:在10mM Tris、300mM NaCl、0.1mM EDTA、1mM DTT、50%甘油PH 7.4中
儲(chǔ)存說(shuō)明:在-20°C下儲(chǔ)存。等分以避免反復(fù)冷凍和解凍。
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艾美捷Cas9核酸酶應(yīng)用:
CRISPR基因組編輯
Electrophoresis

圖:用Cas9核酸酶進(jìn)行電泳DNA切割分析。輸入DNA是EcoRV線性化的pUC57質(zhì)粒DNA。(1)?DNA+gRNA(2)DNA+gRNA+10 ng Cas9(3)DNA+g RNA+25 ng Cas9