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HCX-0050艾美捷人因子Ⅹ解決方案

2023-06-07 15:21 作者:認(rèn)真搞科研的科研達(dá)人  | 我要投稿

因子X(jué)是一種維生素k依賴性蛋白酶原,在肝臟中合成,并以二硫鍵連接的雙鏈分子形式在血漿中循環(huán)。在進(jìn)入血漿之前,后翻譯修飾產(chǎn)生11個(gè)γ-羧基谷氨酸(gla)殘基和一個(gè)b-羥基天冬氨酸殘基,這些殘基位于nh2末端輕鏈內(nèi)。輕鏈還包含兩個(gè)表皮生長(zhǎng)因子(EGF)同源結(jié)構(gòu)域。因子X(jué)的cooh末端重鏈包含大部分的碳水化合物部分,以及潛在的絲氨酸蛋白酶結(jié)構(gòu)域。因子X(jué)的活化是由內(nèi)在因子X(jué)ase復(fù)合物(因子IXa、因子VIIa、細(xì)胞表面和鈣離子)或外在因子X(jué)ase復(fù)合物(因子VIIa、組織因子、細(xì)胞表面和鈣離子)催化的。任何一種復(fù)合物激活人因子X(jué)都會(huì)導(dǎo)致cooh末端重鏈Arg52-Ile53的裂解,隨后釋放52個(gè)氨基酸的激活糖肽。然后,Xa因子作為凝血酶原復(fù)合物的酶組分,負(fù)責(zé)將凝血酶原快速轉(zhuǎn)化為凝血酶。玻璃殘基使因子X(jué)/Xa以鈣依賴的方式結(jié)合磷脂(即細(xì)胞表面);凝血酶原復(fù)合體組裝的必要條件。第一個(gè)EGF同源結(jié)構(gòu)域包含一個(gè)Ca2+結(jié)合位點(diǎn),它作為一個(gè)鉸鏈將EGF和GLA結(jié)構(gòu)域相互折疊。分子的這個(gè)區(qū)域參與細(xì)胞結(jié)合域的識(shí)別。人因子X(jué)是通過(guò)結(jié)合常規(guī)技術(shù)和免疫親和層析從新鮮冷凍的人血漿中分離出來(lái)的。除了標(biāo)準(zhǔn)的人因子X(jué)制備外,也可以使用無(wú)玻璃域的人因子X(jué)。牛因子X(jué)是從新鮮牛血漿中分離出來(lái)的,使用的是對(duì)Bajaj等人報(bào)道的方法的改進(jìn)。小鼠因子X(jué)也從新鮮小鼠血漿中分離得到。純化后的酵素以50% (vol/vol)甘油/H2O的溶液供應(yīng),應(yīng)在-20℃下保存。純度通過(guò)SDS-PAGE分析確定,活性通過(guò)因子X(jué)凝血測(cè)定測(cè)定。

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艾美捷人因子Ⅹ?HCX-0050相關(guān)參數(shù):

Localization:?等離子

血漿濃度:10μg/ml

作用方式:Zymogen;絲氨酸蛋白酶因子X(jué)a的前體

分子量:58900(人)(7)

55100(牛)(8)

59000(鼠)-根據(jù)人類價(jià)值推斷

消光系數(shù):E1 cm,280 nm=11.6(人體)(9)

=12.4(牛)(10)

=11.2(鼠)(13)

等電點(diǎn):4.9-5.2(人)(9),4.8-5.2(牛)(9

結(jié)構(gòu):兩個(gè)亞基,Mr=16200和42000(人類),Mr=116500

和39300(牛),NH2末端gla結(jié)構(gòu)域,和兩個(gè)

EGF結(jié)構(gòu)域

碳水化合物百分比:15%(人)(7)、10%(牛)(8)、10%)(鼠)(13)

翻譯后修飾:11個(gè)gla殘基(7,8)

一種β-羥基天冬氨酸

?

人因子Ⅹ?HCX-0050文獻(xiàn)參考:

1. Davie, E.W., et al., Adv. Enzymol., 48, 277 (1979).

2. Jackson, C.M., Ann. Rev. Biochem., 49, 765 (1980).

3. Bajaj, S.P., et al., Prep. Biochem., 11, 397 (1981).

4. Church, W.R., et al., Thrombosis Res., 38, 417 (1985).

5. Bajaj, S.P., et al., J. Biol. Chem., 248, 7729 (1973).

6. Krishnaswamy, S., et al., J. Biol. Chem., 261, 8997 (1986).

7. Fujikawa, K., et al., Biochemistry, 11, 4882 (1972).

8. Discipio, R.G., et al., Biochemistry, 16, 698 (1977).

9. Discipio, R.G., et al., Biochemistry, 18, 899 (1979).

10. Jackson, C.M., et al., Biochemistry, 7, 4506 (1968).

11. McMullen, B.A., et al., Biochemistry, 22, 2875 (1983).

12. Stenflo, J., Crit. Rev. Eukaryot. Gene Expr., 9, 59-88 (1999).


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