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易基因:DNA甲基化研究的3大前期探索性實驗思路|干貨系列

2023-03-20 14:15 作者:易基因科技  | 我要投稿

大家好,這里是專注表觀組學(xué)十余年,領(lǐng)跑多組學(xué)科研服務(wù)的易基因。

近些年以來,DNA甲基化研究一直是頂級期刊、基金資助、臨床研究、藥物研發(fā)上市的多重?zé)狳c,其研究方向涵蓋疾病發(fā)生發(fā)展、疾病標(biāo)志物研究、環(huán)境因素暴露與響應(yīng)、發(fā)育和分化等多維度。

研究人員為DNA甲基化課題申請作準(zhǔn)備以及為降低DNA甲基化實驗風(fēng)險,通常會進行DNA甲基化研究的前期探索性實驗,主要包括:

  • 檢測DNA甲基化酶和去甲基化酶的表達(dá)

  • 檢測整體DNA甲基化水平變化

  • 其他前期實驗


一、檢測DNA甲基化酶和去甲基化酶的表達(dá)

方法包括:

  • RT-qPCR檢測mRNA表達(dá)

  • Western blot檢測蛋白質(zhì)翻譯

e.g. 高脂飲食組和肥胖人群中均觀察到DNMT的RNA和蛋白質(zhì)表達(dá)上調(diào)


二、檢測整體DNA甲基化水平變化

方法包括:

  • 5mC甲基化免疫熒光染色(定性)

  • DNA斑點雜交(定性)

  • 比色法(定量)

  • 質(zhì)譜法(定量)

斑點雜交(Dot blot)

免疫熒光顯微觀察

比色法/質(zhì)譜法


三、其他前期實驗

在沒有條件開展甲基化相關(guān)前期實驗的情況下,也可以開展其他預(yù)實驗。包括:

  • 關(guān)鍵表型指標(biāo)測定

  • 轉(zhuǎn)錄組(成本低廉)


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