酵母雙雜交 (Y2H) 測(cè)定是一種成熟的檢測(cè)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)。 對(duì)于研究人員來(lái)說(shuō)，這是一個(gè)極其強(qiáng)大的工具，通常與一種或兩種其他方法一起使用，以檢查細(xì)胞中發(fā)生的多種相互作用。 該測(cè)定易于執(zhí)行并在短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生高質(zhì)量的結(jié)果。

原則

1. Y2H 測(cè)定依賴于報(bào)告基因（如 lacZ 或 GFP）的表達(dá)，該基因通過特定轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合而被激活。

2. 轉(zhuǎn)錄因子由 DNA 結(jié)合域 (BD) 和激活域 (AD) 組成。

3. 與 BD 融合的目的蛋白稱為 Bait，與 AD 融合的蛋白庫(kù)稱為 Prey。

4. 為了激活報(bào)告基因的表達(dá)，轉(zhuǎn)錄單位必須存在于基因位點(diǎn)，這只有在 Bait 和 Prey 相互作用時(shí)才有可能。

理論

報(bào)告基因的表達(dá)需要轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合，轉(zhuǎn)錄因子通常由兩個(gè)功能和結(jié)構(gòu)獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域組成：DNA 結(jié)合 (DB) 和激活 (AD) 結(jié)構(gòu)域。 DB 域與報(bào)告基因上游的特定 DNA 序列結(jié)合，而 AD 域激活報(bào)告基因表達(dá)（圖 1A）。

圖 1：Y2H 原則。

由于 AD 和 DB 結(jié)構(gòu)域在功能和結(jié)構(gòu)上是獨(dú)立的，因此它們可以融合到兩個(gè)獨(dú)立的蛋白質(zhì)中。 與 DB 結(jié)構(gòu)域融合的蛋白質(zhì)稱為 Bait，而與 AD 結(jié)構(gòu)域融合的蛋白質(zhì)稱為 Prey。

在沒有 Bait-Prey 相互作用的情況下，AD 域無(wú)法定位到報(bào)告基因以驅(qū)動(dòng)基因表達(dá)（圖 1B）。 然而，當(dāng) Bait 和 Prey 相互作用時(shí)，DB 結(jié)構(gòu)域與定位報(bào)告基因上游 AD 結(jié)構(gòu)域的 DNA 結(jié)合，導(dǎo)致報(bào)告基因的表達(dá)（圖 1C）。