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【細胞解讀系列】如何將HepG2細胞培養(yǎng)好?

2022-12-02 17:43 作者:牛頓光學(xué)研究院  | 我要投稿

牛頓光學(xué)

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? ? ? ?肝臟作為人體五臟之一,與機體正常的代謝、解毒、凝血等過程息息相關(guān),并且參與機體免疫,是維持機體生命不可缺少的重要器官。在進行肝臟疾病的研究中,合適的細胞模型是重要的工具之一,但由于常規(guī)肝細胞獲取困難、培養(yǎng)難度高、培養(yǎng)成本高昂,在一定程度上制約了肝臟疾病研究的發(fā)展。因此,在肝臟研究中選擇培養(yǎng)簡單、遺傳背景穩(wěn)定的肝細胞系則成為了一種替代選擇,其中HepG2是最為常用肝癌細胞系之一。


一、什么是HepG2細胞

? ? ? ?HepG2是來源于一個15歲白人的肝癌組織。該細胞分泌多種血漿蛋白:清蛋白、α2-巨球蛋白、血纖維蛋白溶酶原、鐵傳遞蛋白等。模式染色體數(shù)為55,在免疫抑制小鼠中不致瘤。

(HepG2細胞概述圖)


二、HepG2的細胞特性

1)生長狀態(tài):貼壁生長;

2)形態(tài):上皮細胞;

3)該細胞能大容量培養(yǎng),乙肝表面抗原陰性,對G418 有抗性,對人生長激素有刺激反應(yīng)。


三、HepG2細胞的傳代小知識

1)?待細胞生長到80%-90%匯合度時,吸棄舊的培養(yǎng)基,加入1ml無菌PBS潤洗一次,去除殘余的培養(yǎng)基及血清(血清含有胰酶的抑制因子),然后加入1ml 0.25%胰酶,37℃培養(yǎng)箱中消化(1~2min左右,不同細胞消化時間不同),取出細胞,鏡下觀察細胞至皺縮變圓狀態(tài);

2)?加入1ml完全培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS)終止消化,輕輕拍打,使細胞脫落下來成單個細胞懸液,收集細胞于15ml無菌離心管中,1000rpm,離心5min;

3)?收集細胞沉淀,加入完全培養(yǎng)基重懸細胞,一分為二(可根據(jù)細胞生長速度調(diào)整比例),分別加入到2個新的培養(yǎng)瓶中,做好標(biāo)記,放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。


? ? ? ?在對細胞進行培養(yǎng)、傳代、轉(zhuǎn)染等實驗過程中,對細胞的濃度及活率進行分析尤為重要。牛頓光學(xué)CytoFlu全自動多通道熒光分析儀細胞圖像分析計數(shù)與熒光分析有機結(jié)合,既能提供明場細胞計數(shù)的統(tǒng)計數(shù)據(jù),又可以提供最多13組熒光通道組合的分析結(jié)果。優(yōu)秀的光路系統(tǒng)與圖像識別系統(tǒng),能夠有效的區(qū)分細胞碎片與雜質(zhì)的干擾,得到非常穩(wěn)定可靠的結(jié)果。

(HepG2細胞不同濃度在CytoFlu熒光通道下的Merge圖像)




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