Rockland TrueBlotTM系列二抗能夠特異性的結(jié)合帶有天然二硫鍵結(jié)構(gòu)的IgG(Goat, Mouse或Rabbit)，因此能夠僅檢測(cè)非還原型的IgG（一抗IgG天然構(gòu)象）。

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使用熒光標(biāo)記TrueBlot二抗則可避免這些情況，特異地檢測(cè)出免疫沉淀而得的抗原(如下圖）。

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當(dāng)使用IP分離蛋白時(shí)，捕獲抗體與目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合（Step 1），添加Protein A?或Protein G?包被的磁珠以固定抗體-目標(biāo)蛋白質(zhì)復(fù)合物（Step 2）并洗掉不需要的材料（Step 3）。常規(guī)IP中的最后步驟通常包括使用加熱和還原/變性劑使蛋白質(zhì)變性（Step 4）。

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當(dāng)洗脫的IP樣品通過SDS-PAGE分離（Step 5），后續(xù)Western blot中使用的相同一抗進(jìn)行檢測(cè)，然后分別使用常規(guī)二抗和TrueBlotTM二抗檢測(cè)時(shí)，結(jié)果表面：使用常規(guī)二抗檢測(cè)時(shí)，捕獲抗體的重鏈和輕鏈都可以檢測(cè)到（Step 5?右圖），這可能會(huì)掩蓋您感興趣的蛋白，特別是如果它的大小與IgG重鏈或輕鏈相近時(shí)，使用TrueBlotTM二抗檢測(cè)時(shí)，只檢測(cè)到特異性的目的蛋白（Step 5?左圖）。

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由結(jié)果可知：用傳統(tǒng)的HRP標(biāo)記二抗檢測(cè)時(shí)會(huì)出現(xiàn)輕鏈和重鏈條帶，而用熒光標(biāo)記TrueBlotTM二抗檢測(cè)時(shí)則沒有，表明TrueBlotTM二抗僅識(shí)別天然（非還原）狀態(tài)的一抗，消除重鏈和輕鏈條帶的干擾，以為免疫沉淀樣品提供準(zhǔn)確、出版質(zhì)量的WB結(jié)果。

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熒光標(biāo)記TrueBlot二抗特點(diǎn)：：

1、完全排除的免疫沉淀用一抗重輕鏈的干擾，結(jié)果清晰、準(zhǔn)確，特異性強(qiáng)；

2、使用簡(jiǎn)單，僅將傳統(tǒng)的二抗替換成TrueBlotTM系列二抗即可。

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熒光標(biāo)記TrueBlot二抗注意要點(diǎn)：

1、需對(duì)免疫沉淀物進(jìn)行徹底還原；

2、免疫印跡時(shí)需用牛奶作為封閉液，而不能用BSA(牛血清白蛋白)，因?yàn)楹笳叩姆忾]作用不強(qiáng)。

3、當(dāng)用Rabbit IgG TrueBlotTM對(duì)免疫印跡膜進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，要先用anti-IgG微球來進(jìn)行免疫沉淀步驟，而不能使用Protein A或Protein G微球，因?yàn)楹笳吲cRabbit IgG有很強(qiáng)的親合力，會(huì)引起污染。