直接ELISA

在直接 ELISA 中，抗原或樣品直接固定在板上，偶聯(lián)的檢測抗體與靶蛋白結合。 然后加入底物，產生與樣品中分析物量成正比的信號。 由于在直接 ELISA 中僅使用一種抗體，因此它們的特異性低于夾心 ELISA。

圖1.直接ELISA

在這種形式的 ELISA 中，酶聯(lián)（偶聯(lián)）抗體也對所尋找的抗原具有特異性。 當添加到孔中時，它會與抗原（如果存在）結合。 在酶聯(lián)抗體與抗原反應一段時間后，清洗孔以去除任何未結合的酶聯(lián)抗體（加入底物時會產生假陽性）。 添加底物后，顏色變化是底物酶促轉化為其產物的證據(jù)，表明存在抗原。

間接ELISA

間接 ELISA 與直接 ELISA 的相似之處在于抗原固定在板上，但它包括額外的擴增檢測步驟。 首先，添加未偶聯(lián)的檢測一抗并與特定抗原結合。 然后添加針對一抗宿主物種的偶聯(lián)二抗。 然后底物產生與孔中結合的抗原量成比例的信號。?與直接 ELISA 一樣，未結合的酶聯(lián)抗體被洗掉以防止假陽性結果。 加入酶底物，顏色變化表明試驗呈陽性。

圖2.間接ELISA

夾心 ELISA?

夾心 ELISA 是最常見的 ELISA 類型。 兩種特異性抗體用于將抗原夾在中間，通常稱為匹配抗體對。 捕獲抗體包被在微孔板上，加入樣品，感興趣的蛋白質結合并固定在板上。 然后添加偶聯(lián)檢測抗體并結合靶蛋白上的額外表位。 添加底物并產生與樣品中存在的分析物量成比例的信號。 夾心 ELISA 具有高度特異性，因為需要兩種抗體才能與感興趣的蛋白質結合。

圖3.夾心ELISA