大多熒光染料易于淬滅，缺乏具有靈敏性高、穩(wěn)定性好的標(biāo)記基團(tuán)，伴隨熒光蛋白技術(shù)、光學(xué)技術(shù)，特別是實(shí)時(shí)顯微鏡技術(shù)的革命性發(fā)展,綠色熒光蛋白(GFP)，特別是增強(qiáng)―型綠色熒光蛋白( EGFP)作為一類新型的熒光探針。

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構(gòu)建增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)標(biāo)記的Hela細(xì)胞系方法：PCR和DNA測序鑒定pEGFP-C1真核表達(dá)質(zhì)粒,采用Qiagentip500進(jìn)行pEGFP-C1真核表達(dá)質(zhì)粒DNA的提取和純化;cellfectin轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞.G418篩選,有限稀釋法單克隆培養(yǎng),熒光顯微鏡進(jìn)行熒光檢測EGFP的表達(dá),采用激光共聚焦顯微鏡觀測器檢測熒光特性.結(jié)果PCR和DNA測序證實(shí)pEGFP質(zhì)粒結(jié)構(gòu)正確;在倒置熒光顯微鏡下,轉(zhuǎn)染24h后,部分Hela細(xì)胞可見綠色熒光,轉(zhuǎn)染72h時(shí),大約80%Hela細(xì)胞內(nèi)均可見綠色熒光.加入含G418的選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行選擇性培養(yǎng),選擇熒光較強(qiáng)的Hela細(xì)胞經(jīng)有限稀釋,持續(xù)篩選及克隆化培養(yǎng),獲得穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光的Hela細(xì)胞克隆,擴(kuò)大培養(yǎng)并傳至10代以上,將此細(xì)胞株命名為Hela—EGFP.激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn):在藍(lán)光(-395nm)激發(fā)時(shí),Hela—EGFP細(xì)胞綠色熒光激發(fā)波長為395nm,發(fā)射峰為509nm.Hela—EGFP細(xì)胞株具備穩(wěn)定表達(dá)EGFP的能力.

熒光標(biāo)記葡萄球菌A蛋白SPA

熒光標(biāo)記α-乳白蛋白

熒光標(biāo)記阿霉素核-H亞基鐵蛋白D-HFt

熒光標(biāo)記雞卵白蛋白?Ovalbumin

熒光標(biāo)記肌鈣蛋白I

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星戈瑞熒光2022.8