2023.7.17

下午17.00

清洗和稀釋一抗的PBS含0.5%FPS

人脂肪干細胞（0622M-46Y）

長滿的1瓶T25和100mm培養(yǎng)皿

未計數(shù)，估計200萬？

Pbs洗1遍（加pbs，1500轉(zhuǎn)，離心5min）

最終將細胞稀釋至2.4ml

計劃7個管（1個陰性對照，6個染抗體的管），6個實驗組各300ul，陰性組600ul，共2.4ml

冰上運輸至新校區(qū)實驗室（1h左右）

按上述量將細胞分裝于1.5mlEP管

避光，加抗體，劑量為

避光孵育30min，中途再次混勻1次

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各管加入1mlpbs吹打混勻（清洗）

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1500轉(zhuǎn) 5min 離心后，再加入pbs重懸混勻（按先前的量，實驗組300ul，陰性管600ul）

實際陰性管加入的pbs量為2ml

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將細胞轉(zhuǎn)移至流式管

上機檢測

陰性管用于調(diào)電壓所以所需的量較多

電壓參數(shù)：

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共做3遍(第3遍CD73管細胞不夠)

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回顧：之前的CD73陽性率不高，所以本次增加了劑量到3uL;CD90抗體用量可以減少到0.8-0.9uL；本次各指標均符合預期。

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