今天要推薦的是來(lái)自QIAGEN的一個(gè)miRNA熒光定量的驚喜“小禮包”：miRCURY LNA miRNA PCR Starter Kit（貨號(hào)：339320）

試劑盒包含逆轉(zhuǎn)錄試劑、SYBR Green qPCR Mix，還有UniSp6模板及引物，一個(gè)候選內(nèi)源對(duì)照引物組引物（miR-103a-3p）和兩個(gè)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的引物組（可任選2條預(yù)制引物哦，物種包含人、大鼠、小鼠），所有試劑均通過(guò)LNA技術(shù)進(jìn)行了增強(qiáng)。這些試劑足夠定量分析多達(dá)20個(gè)樣品。

關(guān)于性能，也是非常厲害的！有圖有真相，可以從低至 1 pg 的總 RNA 起始材料進(jìn)行準(zhǔn)確定量！再也不用擔(dān)心樣本量太少?zèng)]辦法定量啦！

Tips：我們建議在研究miRNA表達(dá)時(shí)，選擇的內(nèi)參是內(nèi)源性內(nèi)參基因應(yīng)是穩(wěn)定表達(dá)的miRNAs，而不是較長(zhǎng)的RNA物種，如snoRNAs和包括U6在內(nèi)的snRNAs。這是因?yàn)閙iRNAs較短，在提取和逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程中可能與較長(zhǎng)的轉(zhuǎn)錄本有非常不同的行為。根據(jù)樣本的來(lái)源，一些常用的參考miRNAs包括：hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-423-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-16-5p、hsa-miR-423-5p和hsa-let-7a-5p。

而人工合成的RNA spike-in 在檢查miRNA分離、cDNA 合成和 PCR 擴(kuò)增效率差差異的過(guò)程中，可以起到全程監(jiān)控的作用，可能揭示核酸酶的潛在存在。方法是分別在 RNA 分離和 cDNA 合成之前向樣品中添加已知量的 RNA 摻入物，如試劑盒提提到的Unisp6，或RNA Spike-In Kit, For RT。

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