核糖核酸酶?A物化性質(zhì)：

物化性質(zhì)?白色結(jié)晶或凍干粉，易溶于水，pI7.8，最適pH值7.7。穩(wěn)定性：最穩(wěn)定 pH范圍2-4.5，冷藏凍干粉或結(jié)凍的酶液可保存數(shù)年活力不變。抑制劑有脫氧核糖核酸(競爭性抑制劑)、變性脫氧核糖核酸(比天然的更有效)、 0.0005 mol/L Mg2+。酶反應：專一催化核糖核酸的核糖部分3'和5'磷酸二酯鍵的裂開，形成具有2'，3'-環(huán)磷酸衍生物寡聚核苷酸。

?

核糖核酸酶?A用途：

1、從?DNA：RNA 雜交體中去除未雜交的 RNA 區(qū)；

2、確定?RNA 或 DNA 中的單堿基突變的位置。在 RNA：DNA 或 RNA：RNA 雜交體中，若存在單堿基錯，可用 RNAseA 識別并切割。通過凝膠電泳分析切割產(chǎn)物的大小，即可確定錯配的位囂；

3、RNA 檢測。RNA 酶保護分析法是近年來發(fā)展起來的一種檢測 RNA 的雜交技術；

4、降解?DNA 制備物中的 RNA 分子。

?

艾美捷核糖核酸酶?A（WBC-LS003435）在胞苷殘基處的切割速度是尿苷殘基的兩倍（Richards和Wyckoff 1971）。Thr45被發(fā)現(xiàn)對介導嘧啶特異性最重要，既通過與嘧啶堿形成氫鍵，又在空間位上排除嘌呤堿（del Cardayré和Raines 1994）。Asp83的側(cè)鏈對于穩(wěn)定含尿苷底物裂解過程中的過渡態(tài)很重要;這種殘留物對胞苷切割的動力學沒有影響（del Cardayré和Raines 1995）。

?

RNase A對嘧啶核苷鍵具有特異性（Volkin和Cohn 1953）。反應被認為分兩步進行。第一步，裂解3'，5'-磷酸二酯鍵，同時生成2'，3'-環(huán)磷酸二酯中間體。在第二步中，環(huán)磷酸二酯被水解成3'-單磷酸基團。第一步是關于底物的含氮堿的非特異性;然而，第二步對于末端為2'，3'-環(huán)磷酸鹽的嘧啶核苷酸是絕對特異性的。RNase B與RNase A對環(huán)胞苷酸和酵母RNA具有相同的特異性（Plummer和Hirs 1963）。RNase A顯示出對較大底物的偏好（Nogués等人，1995）。

應特別注意酶的處理，因為它與玻璃表面的親和力。該酶保持活性，但在凍干時聚集，并在低離子強度的溫度≥2°C的溶液中聚集。RNase A的加熱溶液使DNA酶失活可能不令人滿意，因為如果發(fā)生沉淀形成并且熱處理的DNase可能會隨著時間的推移重新激活，RNA酶活性可能會喪失。代碼： RPDF 適用于需要最低 DNase 和蛋白酶水平且無需進一步處理的應用。代碼： RAF在某些應用中無需處理即可使用。要熱處理 RAF，請使用 10mM 乙酸鹽 pH 5.0 和或不帶 15mM CaCl 2 在 15°C 或更長時間下在 100°C 下 80 分鐘。 如果在中性pH下加熱，可能會沉淀。代碼的熱處理：由于磷酸鹽的存在，RASE會沉淀。 ?

?

核糖核酸酶?A部分引用文獻：

Andini, S. , D'Alessio, G. , DiDonato, A. , Paolillo, L. , Piccoli, R. and Trivellone, E.

Comparative Proton NMR Studies of Bovine Semen and Pancreas Ribonucleases , Biochim Biophys Acta 742 , 530 , 1983

Anfinsen, C. and White, F.

The Ribonucleases , in The Enzymes Vol. 5 , (Boyer, P., Lardy, H., and Myerback, K., Eds.) , Academic Press, NY , 95 , 1961

Anfinsen, C. , Redfield, R. , Choate, W. , Page, J. and Carroll, W.

Studies on the Gross Structure, Cross-Linkages, and Terminal Sequences in Ribonuclease , J Biol Chem 207 , 201 , 1954