補(bǔ)充 1.前人的菌液一定要先驗(yàn)證，確保正確且活性較好（甚至可以最開始就用質(zhì)粒重新轉(zhuǎn)BL21（DE3）等表達(dá)蛋白菌株以確?；钚粤己茫?2.誘導(dǎo)時(shí)選擇IPTG到1，37度3h（數(shù)小時(shí)），先看能不能誘導(dǎo)出來(lái)（小表），降溫和降低IPTG濃度是為了降低包涵體的量，保證可溶性蛋白足夠后續(xù)實(shí)驗(yàn) 3.beads：如果beads吸出來(lái)一坨，堵住了槍頭那可能是試劑沒有保存好，染菌了 4.理論上gst純化過程中，E廢液中蛋白量很少（因?yàn)楸旧韌st是助溶的，且2ml beads純化500ml菌足夠了，應(yīng)該也不是beads的量的原因，如果beads本身沒問題，那就算換個(gè)beads也沒用，結(jié)合方式一樣的嘛，所以有可能beads有點(diǎn)問題了） 5.蛋白的保存：分管保存-80度，用的時(shí)候拿一管出來(lái)放4度，就不要再放-80度了，避免反復(fù)凍融，統(tǒng)一就不放-20度了 6.蛋白直接放-80保存的更久還是制樣保存-80更久？制樣更久（當(dāng)然看你純化出來(lái)的蛋白是干啥的），制樣保存-80度比-20度更久